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肝臓形質膜におけるATPに依存したグルタチオン抱合体輸送体の性質

肝质膜中 ATP 依赖性谷胱甘肽结合转运蛋白的特性

基本信息

批准号：
03680149
负责人：
小林一雄
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

肝細胞内に取り込まれた薬物や発癌性物質はグルタチオンやUDPーグルクロン酸と反応し抱合体を生成することにより解毒化され、胆管内へ輸送される。これら抱合体の輸送はATPに依存した特異的輸送体によるものと考えられており、先に我々はラット肝臓形質膜のcanalicular小胞体において、この輸送がATPに依存した一次能動輸送であることを明らかにした。しかしながらATPがこの輸送にどう共役しているか分かっていない。そこで本研究ではラット肝臓形質膜より、この輸送タンパク質を精製し、この性質を調べることにした。ラット肝臓により形質膜を単離し、オクチルグルコシド(OG)により可溶化し、種々のカラムクロマトグラフィ-により精製を行った。なお活性は各段階でリポソ-ムに再構成し、ATPに依存したグルタチオン抱合体のリポソ-により精製を行った。なお活性は各段階でリポソ-ムに再構成し、ATPに依存したグルタチオン抱合体のリポソ-ム内への輸送を調べた。可溶化後2,4ーdinitrophenyl glutathione(DNPーSG)が結合したアフィニティカラムおよび高速液体クロマトグラフィ-によるゲルロ過により60倍活性が増加した。またこの再構成系にて、ATPに依存したDNPーSGおよびロイコトリエンC_4(LTC_4)の輸送がみられ、グルクロニドの輸送は観測されなかった。このことはグルタチオン抱合体とLTC_4は同一の輸送体であるが、グルクロニドは別の輸送体であることが分かった。またこの精製したタンパク質はATPase活性が見られ、DNPーSGの添加によりATPase活性が約2倍増加した。またこのATPase活性に対するDNPーSGおよびATPに対するK_m値は輸送に対するそれとよく一致することから、このATPase活性と輸送が直接共役していると結論される。またこの輸送タンパク質の分子量はSDSーゲル電気泳動により、62,000であることが分かった。

In the liver cells, the cancerous substances are removed and the cancerous substances are removed and the UDP is removed. It can be used to generate, detoxify and transport the acid into the bile duct.これらEmbedded body のtransport はATP にdepends したSpecial transporter によるものとKaoえられており、First に我々はラットliver-shaped plasma membraneのcanalicular small cell body において, このtransport がATP にdependence した once active transport であることを明らかにした.しかしながらATPがこのtransport にどう同事しているか分かっていない. In this study, we analyzed the liver capsule-shaped plasma membrane, the transport quality, the purification, and the properties of the liver.ラット liver stasis type plasma membrane を単し, オクチルグルコシド (OG) によりSolubilized し, Kind 々のカラムクロマトグラフィ-により Refined を行った. Each stage of NANO active and でリポソ-ムに restructured, ATP dependence したグルタチオン hugging body のリポソ-により refined を行った.なおActivityはEach stage of でリポソ-ムにReconstructionし, ATP にdependence したグルタチオン hugging body のリポソ-ム内へのtransport を Adjustment べた. After solubilization 2,4-dinitrophenyl glutathione(DNPーSG)が合したアフィニティカラムおよびHigh-speed liquid クロマトグラフィ-によるゲルロ高により60 times active が Increase plus した.またこのReconstruction system にて、ATP にdependence したDNPーSG およびロイコトリエンC _4(LTC_4)の出がみられ、グルクロニドの Transportは観measurementされなかった. The same transport body as the LTC_4 same transport bodyであるが、グルクロニドは比の Transport Body であることが分かった.またこのRefined したタンパクquality はATPase activity が见られ, DNPーSGのadded によりATPase activity が has been increased by about 2 times.またこのATPase activity に対するDNPーSG およびATP に対するK_m値は Transportation に対するそれとよく unanimous することから、このATPase activity and transport がDirect co-operation していると Conclusion される. The molecular weight of the またこのtransportation material is はSDSーゲルelectrophoresis により, 62,000であることが分かった.