システイニルロイコトリエン輸送タンパク質の性質

半胱氨酰白三烯转运蛋白的特性

基本信息

  • 批准号:
    04680163
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 1.15万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
  • 财政年份:
    1992
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1992 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

ラット肝臓形質膜のcanalicular膜における、システイニルロイコトリエンの一種であるLTC_4のATPに依存した輸送機構を明らかにするために、LTC_4の輸送タンパク質を精製し、その性質を調べた。ラット肝臓より形質膜を単離し、オクチルグルコシド(OG)により可溶化し、2,4-dinitrophenyl glutathione(DNP-SG)が結合したアフィニティカラムおよび高速液体クロマトグラフィーによるゲルロ過を行った。この最終標品をリポソーム膜に再構成したところ、ATPに依存したDNP-SGおよびLTC_4の取り込みが見られ、その輸送活性は形質膜をOGで直接リポソーム膜に再構成したものと比較して、すくなくとも40倍に増加した。またこの再構成系にて、ATPに依存したDNP-SGおよびLTC_4の輸送がみられ、グルクロニドの輸送は観測されなかった。このことはグルタチオン抱合体とLTC_4は同一の輸送体であるが、グルクロニドは別の輸送体であることが分かった。またこの精製したタンパク質はATPase活性が見られ、DNP-SGの添加によりATPase活性が約2倍増加した。またこのATPase活性に対するDNP-SGおよびATPに対するKm値は輸送に対するそれとよく一致することから、このATPase活性と輸送が直接共役していると結論される。またこの輸送タンパク質の分子量はSDS-ゲル電気泳動により、62KDaのmain bandと82KDaと110KDaのバンドが観測された。さらのどのタンパク質が輸送体かを確かめるために、photo-affinity試薬として【^3H】LTC_4および[^<35>S]ATPγSを用い、液体窒素温度で中で各精製過程のタンパク質をキセノンランプにより約20分間光照射後、SDS電気泳動を行った。その結果LTC_4、ATPγSともに62KDaのタンパクがラベルし、62KDaのタクパク質がLTC_4の輸送体であることを確認した。
The liver-shaped membrane, the ATP membrane, the liver, the The high-speed liquid is used to improve the performance of the high-speed liquid, such as the high-speed liquid, the high-speed liquid. The most standard product, the membrane, the ATP, the DNP-SG, the LTC4, the active membrane, the OG membrane, the membrane, the membrane, the The information system is reorganized into a series of data, and the ATP data are dependent on the data of the DNP-SG, LTC4, and LTC4. Please tell me that the LTC_4 is the same as that of the clasp. The activity of ATPase is about twice as high as that of DNP-SG, which is about twice as high as that of ATPase. The ATPase activity, the DNP-SG activity, the ATP activity, the Km response, the conformance test, the ATPase activity test, the direct co-service test, the test results, and the test results. The molecular weight (MW), the 110KDa (110KDa), the molecular weight (MW), the molecular weight (MW The transporter makes sure that the temperature is sensitive, the photo-affinity is sensitive, the LTC_4 is sensitive, the ATP γ S is used, the temperature of the liquid asphyxiant is high, and the temperature of the liquid asphyxiant is very sensitive. After 20 minutes of light irradiation, the SDS electrophoresis was performed. The results showed that LTC_4, 62KDa, 62KDa, and 62KDa were all confirmed.

项目成果

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