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カボチャのアスコルビン酸酸化酵素遺伝子の組識特異的発現とその制御機構の解明

南瓜抗坏血酸氧化酶基因的组织特异性表达及其调控机制的阐明

基本信息

批准号：
03257206
负责人：
江坂宗春
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

アスコルビン酸酸化酵素cDNAをプロ-ブとしたノ-ザンブロット法によりカボチャ細胞におけるアスコルビン酸酸化酵素の種々の生産調節が転写レベルで制御されているのかどうかを調べた。これまでに、カボチャ果実組織からのカルス化に伴いアスコルビン酸酸化酵素活性およびタンパク質が急激に増大することを明らかにしているが、ノ-ザンブロットの結果からアスコルビン酸酸化酵素mRNAもカルス化にともない増大することがわかった。ホルモンである2、4ーDをぬくとアスコルビン酸酸化酵素mRNAは増大しないこと、同じカボチャの分泌性酵素であるキチナ-ゼは2、4ーDあるなしにかかわらず増大することなどから、アスコルビン酸酸化酵素は2、4ーDにより誘導されるものと思われる。すなわち、アスコルビン酸酸化酵素遺伝子の転写がオ-キシンにより制御されている可能性が示された。一般に、アスコルビン酸酸化酵素はウリ科植物の果実組織に多量に発現する酵素とされていた。しかし、ノ-ザンブロットの結果から新鮮な葉や茎組織にもかなりのアスコルビン酸酸化酵素mRNAが認められた。一方、カボチャ種子中にはアスコルビン酸酸化酵素mRNAは認められなかったが、吸水発芽にともなって、急激にアスコルビン酸酸化酵素mRNAが蓄積されていった。アスコルビン酸酸化酵素が2、4ーDで誘導されること、アスコルビン酸酸化酵素が細胞壁に局在する酵素であることなどを考えあわせると、アスコルビン酸酸化酵素が細胞の生長や増殖になんらかの関与をしている可能性が強い。カボチャ果実組織からゲノムDNAを抽出し、アスコルビン酵酸化酵素cDNAをプロ-ブとしたサザンブロットをおこなった結果、アスコルビン酸酸化酵素遺伝子のハプロイドゲノムあたりのコピ-数は1〜3コピ-と推定した。カボチャ果実組織のDNAからゲノムDNAライブラリ-を作製し、アスコルビン酸酸化酵素のゲノム遺伝子を単離した。今後、さらにアスコルビン酸酸化酵素遺伝子の発現調節の機構を明らかにしていきたい。

The regulation of the production of the enzyme cDNA in the cell line is regulated by the regulation of the production of the enzyme cDNA. The results of this study include an increase in enzyme activity and a decrease in enzyme activity. The results of this study include an increase in enzyme activity and an increase in enzyme activity. 2, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 19, 10, 10, 11, 10, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 10, 10, 11, 10, 10, 11, 12, 10, 12, 13, 14, 15, 16, 18, 19, 10, 10, The possibility of controlling the production of enzymes from different enzymes is shown. In general, Askolvin acidifying enzyme is an enzyme found in large amounts in the fruit tissues of plants of the Thaliaceae family. As a result of this, the enzyme mRNA was recognized in fresh leaf and stem tissues. In one case, the enzyme mRNA was accumulated in the seed. The possibility that the enzyme 2 and 4 may be induced in the cell wall is stronger than that of the enzyme 2 and 4. The DNA of the enzyme was extracted from the tissue and the protein was extracted from the DNA. The DNA of the tissue is divided into two parts: the DNA is divided into three parts: the DNA is divided into four parts In the future, the mechanism for regulating the production of acetylating enzymes will be clarified.