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超臨界二酸化炭素の酵素タンパク質の構造および活性に及ぼす影響

超临界二氧化碳对酶蛋白结构和活性的影响

基本信息

批准号：
06214204
负责人：
藤本健四郎
金额：
$ 0.83万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06214204/
关键词：
超臨界二酸化炭素酵素ペルオキシダーゼ動力学

项目摘要

研究担当者は、超臨界二酸化炭素(SC-CO2)中で種々の酵素反応を行ったところ、ポリフェノールオキシダーゼやカタラーゼなどの金属を活性中心にもつ酸化還元酵素は、他の酵素に比べて不安定で容易に失活することを認めた。そこで本研究では、この金属含有の酸化還元酵素がSC-C02中で失活しやすい原因を追究するため、食品の劣化に関与し、かつ反応機構や活性部位の構造が比較的解明されているペルオキシダーゼを取り上げ、SC-CO2による酵素の阻害様式を動力学的に考察した。酵素としては西洋ワサビ由来のペルオキシダーゼを用い、リン酸緩衝液に溶解後、圧力10-20MPa、温度35℃のSC-CO2を導入した。その結果、酵素は処理時間とともに擬一次反応的に活性が低下したが、濃度が高い状態では酵素は安定化した。一方、SC-CO2による酵素の阻害様式を熱やpH低下による失活と比較したところ、Lineweaver-Burkプロットにおいて、SC-CO2処理では、基質のピロガロールに対し非括抗的、H202に対し不括抗的阻害様式を示すことから、熱やpH低下による阻害とは異なることが明らかとなった。またペルオキシダーゼの紫外可視部吸収スペクトルにおいて、酵素に含まれるヘム由来のSoret帯吸収(402nm)がSC-CO2処理により著しく減少すること、および円偏光二色(CD)分析においてヘム近傍の構造に由来する400-500nmのCDスペクトルがSC-CO2処理により正から負へと変化することから、SC-CO2によりペルオキシダーゼ内のヘムをめぐる立体構造が大きく変化していることが示唆され、このことが金属含有の酸化還元酵素が他の酵素よりもSC-CO2処理によって失活しやすい原因と思われた。

In the study, several kinds of enzymes in SC-CO2 were used to reduce the activity of ferment and other enzymes in the active center of the metal. The purpose of this study is to investigate the causes of inactivation of enzymes in acidified reductase SC-C02, food deterioration and bioactive parts of anti-cancer mechanisms. in this study, the causes of inactivation of enzymes in SC-C02 were investigated, and the active parts of food degradation mechanisms were analyzed. After the enzyme was dissolved, the temperature was 35 ℃, and the temperature was 35 ℃. After the enzyme was dissolved, the enzyme was dissolved in the solution, and the temperature was 35 ℃. The temperature was 35 ℃ and the temperature was 35 ℃. The temperature was 35 ℃ and SC-CO2 was added. The results showed that the enzyme activity was low in one time, and the enzyme was stabilized in high temperature. On the one hand, SC-CO2 enzyme block, enzyme inactivation, pH inactivation, Lineweaver-Burk inactivation, SC-CO2 blockage, H202 enzyme blockage, H202 enzyme blockage, enzyme inactivation, inactivation, The reason for this is that the Soret absorption (402nm), the SC-CO2 analysis, the polarizing dichroism (CD) analysis, the 500nm absorption, the SC-CO2 analysis, the UV absorption, the SC-CO2 analysis, the UV absorption, the enzyme, the UV absorption, the UV, the ultraviolet, the SC-CO2, the enzyme, the absorption, the absorption, the polarizing dichroism, the cause, the origin, the cause, the origin, the origin, In the SC-CO2 system, the main reason for the inactivation of the metal is due to the presence of acidified reductase. The reason for the inactivation is very important.