細胞複製を制御する細胞内シグナルと遺伝子発現

控制细胞复制的细胞内信号和基因表达

• 批准号: 06247212
• 负责人: 貝淵 弘三
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Nara Institute of Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06247212/
• 关键词: 細胞内シグナル; G蛋白質

細胞複製制御におけるRasおよびその類似G蛋白質の作用機構の解析を行い以下の結果を得た。(1)RasによるMAPキナーゼの活性化機構私共はツメガエル卵の細胞質画分からRas依存性にMAPキナーゼ・キナーゼを活性化するのに必要な蛋白質因子(REKS)を部分精製している。昨年度は、REKSがRas依存性にMAPキナーゼ・キナーゼをリン酸化して活性化するプロテインキナーゼであることを明らかにした。また、RasがREKSと複合体を形成することから、REKSはRasの直接のターゲットであると考えている。最近、Rasがc-Raf-1と結合することが報告されているが、REKSがc-Rsf-1でないことを確認している。本年度は、ツメガエル卵の細胞質画分からREKSを高度に精製した。また、REKSが牛大脳細胞質画分にも存在することを明らかにし、これを均一蛋白質にまで精製した。ツメガエル卵と牛大脳から精製されたREKSは、ともに分子量約10万のプロテインキナーゼであり、自己リン酸化能を示した。一方、Cキナーゼやホスホリパーゼの制御因子として知られる14-3-3がRasと共同してREKSを活性化することも明らかにした。(2)R-Rasの標的蛋白質の同定GTP結合型のR-Rasをマトリックスに固定化してアフィニティカラムクロマトグラフィーを行い、R-Rasの標的蛋白質の同定を試みた。その結果、牛大脳からGTP-R-Rasに結合する分子量約10万の蛋白質(p100)を分離精製できた。この蛋白質はGDP結合型のR-Rasには結合せず、標的蛋白質結合領域に変異を導入したGTP結合型のR-Rasにも結合しなかった。また、GTP結合型のH-RasとRhoには結合しなかった。したがって、この蛋白質はR-Rasの標的蛋白質のひとつであると考えられる。この蛋白質の部分アミノ酸配列からcDNAをクローニングしたところ、Ras GAPとホモロジーがあることが判明した。以上本年度の研究計画はほぼ達成することができたと考えている。

The following results were obtained from the analysis of the mechanism of G-protein-like action in cell division control: (1) Partial purification of essential protein factors (REKS) necessary for activation of Ras MAP and its activation mechanism. The year before, the Ras dependency MAP was activated. Ras and REKS complex are formed directly from each other. Recently, Ras g c-Raf-1 This year, the cytoplasm of eggs is highly refined. REKS is a protein protein that exists in the cytoplasm of large cattle. The molecular weight of REKS is about 100,000. A party, C, C (2) The identification of R-Ras target protein by GTP binding was studied. As a result, the protein (p100) with molecular weight of about 100,000 was isolated and purified from GTP-R-Ras. The protein binding domain of the GDP-binding R-Ras is different from that of the target protein binding domain. Also, the GTP-bound H-Ras and Rho are combined. R-Ras is the target protein of R-Ras. Some of these proteins are found in cDNA sequences. The above research plan for this year has been completed.