色素性乾皮症D群の変異とタンパク機能

着色性干皮病 D 组的突变和蛋白质功能

• 批准号: 06263211
• 负责人: 藤原 美定
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06263211/
• 关键词: 色素性乾皮症; 色素性乾皮症D群遺伝子; 色素性乾皮症D群蛋白質; 修復ヘリカーゼ; 色素性乾皮症D群抗体; 遺伝子変異; DNA修復

ヒトでは色素性乾皮症(XP)はUVによるピリミジン2量体(CPD)と(6-4)産物のヌクレオチド除去修復を欠損し,コケイン症候群(CS)は転写活性遺伝子のみのヌクレオチド除去修復を欠損する.われわれは最近XPD cDNAを発現クローニングした.XPD細胞はバルクDNA領域と転写活性遺伝子の両方の修復を欠損するので,本研究では(1)XPD蛋白の構造とヘリカーゼ機能及び修復・転写複合体への関与,(2)日本人XPD患者5名のノザン解析とXPD cDNAのRNA probeによるRNase protection assayによって変異を研究した.発現クローニングによって得たXPD cDNA(2372bp ORF)は760残基ペプチド(分子量87K,pI7.4)をコードし,DNA/RNA helicase motifs(I,Ia,II,III,IV,V,VI)とDNA結合domain(α-helix/turn/α-helix)をもった.GST-XPD融合蛋白や合成オリゴペプチドから〜90kDXPD蛋白を識別する抗体を得た.この抗体を用いたウエスタンブロット分析は,XPD蛋白はUV-DNAの修復複合体やTATA配列をもつdhfr/exon-1との転写複合体の中に存在し,ATP,Mg^<2+>依存性の修復・転写ヘリカーゼであることを強く示唆した.mRNAノザンブロットとRNase protection法は,XPD患者日本人3名と欧米人3名はXPDmRNAのサイズ(〜2.6kb)と発現量に大きい差はないので微小変異もち,日本人2名の患者には大きい異常がみられるので欠失変異をもつことを示唆した。

Patients with xeroderma pigmentosum (XP), UV xeroderma pigmentosum, xeroderma pigmentosa, xeroderma pigmentosa, xeroderma pigmentosum, xeroderma pigmentosa, xeroderma pigmentosa, xero Recently, XPD cDNA has shown that there is no significant difference between the two groups in the field of DNA. In this study, (1) XPD protein was used to create a complex that can be used to write a complex, and (2) five Japanese patients with XPD were enrolled in this study. XPD cDNA (2372bp ORF) 760 (molecular weight 87K ~ pI7.4), DNA/RNA helicase motifs (DNA/RNA helicase motifs), DNA (α-helix/turn/ α-helix) and GST-XPD fusion protein (α-helix/turn/ α-helix) were obtained. The fusion protein GST-XPD was used to synthesize 90kDXPD protein. XPD protein UV-DNA repair complex TATA ligand dhfr/exon-1 write complex existence, ATP, mg ^ & lt;2+&gt There were three Japanese patients with XPD, three XPDmRNA patients, three Omi patients (~ 2.6kb), three Omi patients, two Japanese patients, two patients, and two patients.

项目成果

西尾永英,藤原美定: "コケイン症候群" Gerontology.7. 43-49 (1995)

Nagahide Nishio，Yoshisada Fujiwara：“科凯恩综合症”老年学.7 43-49（1995）。

Matumoto A,Fujiwara Y et al: "Photoactivated gilvocarcin V induces DNA-protein crosslinking in genes for human ribosomal RNA and dihydrofolate reductase." Photochemistry and Photobiology. 60. 225-230 (1994)

Matumoto A、Fujiwara Y 等人：“光激活的 gilvocacin V 诱导人核糖体 RNA 和二氢叶酸还原酶基因中的 DNA-蛋白质交联。”

Itoh T,Fujiwara Y et al: "UV-sensitive syndrome: Clinical and biochemical characteristics of a new DNA repair defective syndrome not belonging to any group of xeroderma pigmentosum and Cockayne syndrome." Human Genetics. (印刷中).

Itoh T、Fujiwara Y 等人：“紫外线敏感综合征：不属于任何着色性干皮病和科凯恩综合征的新 DNA 修复缺陷综合征的临床和生化特征”。