色素性乾皮症の修復欠損に関する遺伝子とタンパク質の異常

与着色性干皮病修复缺陷相关的基因和蛋白质异常

• 批准号: 04151041
• 负责人: 藤原 美定
• 金额: $ 8.96万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04151041/
• 关键词: 色素性乾皮症; 修復酵素; 修復遺伝子; UV損傷に対する特異抗体; 発癌性突然変異

本研究は班組織として色素性乾皮症(XP)のDNA修復欠損とタンパンの異常、XPACタンパクと複合体を形成する因子、XPCとXPDの欠損を相補する遺伝子、修復に関連する遺伝子とタンパク等について研究している。数種のXPC細胞にのみ共通する74kDのDNA依存性ATPase Q1のDNAヘリカーゼ活性の著減とモノQカラム溶出位置の変化が見られた。この精製正常酵素のアミノ酸配列のオリゴヌクレオチドをプローブとしてクローニングしたATPase Q1 cDNAはヘリカーゼドメインをもち、ヒト染色体12p12にあり、4.3kb mRNAをコードする。ヒトcDNAを用いた発現クローニング実験によって、XPD細胞のUV高感受性と修復欠損を3倍回復させる形質転換株が得られ、このcDNAは約2.5kbであった。XPAを相補するXPAC cDNAから合成したXPACタンパクは、Zn-fingerを介してUV損傷DNAにより強く結合し、そのドメインのCys-108を人工変異させるとDNA結合性と修復活性を失う。また、XPACタンパクはPCNA,DNA polymerase-δ,RF-Cを含む少なくとも5つのタンパクと複合体を作り、初期修復段階や修復合成に関与する。修復酵素に関し、塩基欠失部位を修復するAPEX nucleaseのヒトcDNAがクローニングされ、1.5kb mRNAと318アミノ酸からなる35.4kDタンパクとして脳などの組織で発現する。一方、UV損傷のピリミジン2量体、(6-4)光産物とその光異性体のDewar異性体に対する特異的単クローン抗体が樹立できた。これを用いると、XPA,XPDでは2量体と(6-4)産物の修復欠損が目立ち、XPAC cDNA導入細胞では両損傷を正常に修復することが明かになった。UVの発癌性突然変異をPCR-SSCP法と直接シーケンシングによってXP患者の皮膚腫瘍を用いて解析すると、癌抑制遺伝子のp53のエクソン4,5,6のTCとCC配列においてC→Tへの突然変異(G:C→A:T)が皮膚腫瘍の63%の高い頻度で見られ、p53変異が重要であった。

This study focuses on the study of impaired DNA repair and abnormalities in xeroderma pigmentosum (XP), factors responsible for the formation of the XPAC complex, genes that complement the impaired XPC and XPD, and genes and abnormalities related to repair. A 74kD DNA-dependent ATPase Q1 in several XPC cell lines showed a decrease in DNA activity and a change in Q1 release site. The Q1 cDNA sequence of the purified cDNA sequence of the cDNA sequence of the cDNA sequence XPD cells showed high UV sensitivity and repair deficiency. The cDNA was about 2.5 kb long. XPAC cDNA synthesis, XPAC DNA synthesis, Zn-finger mediated UV damage to DNA, strong binding, Cys-108 induced mutation, DNA binding and repair activity loss. XPAC, PCNA,DNA polymerase-δ,RF-C, DNA polymerase-δ, DNA polymerase-δ, DNA The APEX nucleotide cDNA sequence for repair enzymes involved in gene deletion repair and the 1.5 kb mRNA sequence for 318 bp DNA deletion were found in tissues. One side, UV damage detection system 2 quantity,(6-4) photoproducts and the corresponding specific detection system antibody was established. XPAC cDNA was introduced into cells to repair damaged cells. XPAC cDNA was introduced into cells to repair damaged cells. PCR-SSCP analysis of skin lesions in XP patients with sudden changes in the distribution of p53 and TC CC (G:C→A:T) was performed at a high frequency of 63%.

项目成果

Matsunaga,T.: "Establishment and characterization of a monoclonal antibody recognizing the Dewar isomers of (6-4)photoproducts." Photochemistry and Photobiology.

Matsunaga,T.：“识别 (6-4) 光产物杜瓦异构体的单克隆抗体的建立和表征。”

Yanagisawa,J.: "Alteration of a DNA-dependent ATPase activity in xeroderma pigmentosum complementation group C cells." Journal of Bioligical Chemistry. 267. 3585-3588 (1992)

Yanagisawa,J.：“着色性干皮病互补 C 组细胞中 DNA 依赖性 ATP 酶活性的改变。”

Fujuwara,Y.: "A new anticancer platinum compound,(-)-(-R)-2-aminomethylpyrrolidine (1,1-cyclodicarbo-xylato)platinum(II):DNA interstrand crosslinking,repair and lethal effects in normal human,Fanconi's anemia and xeroderma pigmentosum cells." British Jour

Fujuwara,Y.：“一种新型抗癌铂化合物，(-)-(-R)-2-氨基甲基吡咯烷(1,1-环二碳基-木糖基)铂(II)：DNA链间交联、修复和对正常人的致死作用，

Seki,S.: "cDNA cloning,sepuencing,expression and possible domain structure of human APEX nuclease homologous to Escherichia coli exonuclease III." Biochim.Biophys.Acta. 1131. 287-299 (1992)

Seki,S.：“与大肠杆菌核酸外切酶 III 同源的人 APEX 核酸酶的 cDNA 克隆、测序、表达和可能的结构域结构。”

Yagi,T.: "UV-induced base subtitution mutations in a shuttle vector plasmid propagated in group C xeroderma pigmentosum cells." Mutation Research. 273. 213-220 (1992)

Yagi,T.：“在 C 组色素性干皮病细胞中繁殖的穿梭载体质粒中，紫外线诱导的碱基取代突变。”