色素性乾皮症の修復欠損に関わる遺伝子とタンパクの異常

参与着色性干皮病修复缺陷的基因和蛋白质异常

• 批准号: 03151041
• 负责人: 藤原 美定
• 金额: $ 6.27万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03151041/
• 关键词: 色素性乾皮症; A群色素性乾皮症相神遺伝子; DNA除去修復; DNA依存性ATPase; UV損傷単クロ-ン抗体; UV誘発突然変異; in vitro修復検出系; 色素性乾皮症A群の遺伝子診断

色素性乾皮症(XP)の遺伝子とタンパクの異常や修復欠損機構について研究し,(1)A群XP遺伝子の遺伝性突然変異はイントロン3のスプライシング変異,エクソン6のArg^<238>のノンセンス変異,エクソン3のTyr^<116>のノンセンス変異がそれぞれ85%,13%,4%に見られ,遺伝子診断が可能となった。(2)正常XPACタンパクは40,38Kの核蛋白で,DNA結合性タンパクであるが,XPA細胞では異常なmRNAと欠損もしくは異常タンパクが見られ,人工改変したXPAC遺伝子(3'側の改変)は導入したXPA細胞で修復欠損を示した。(3)C群XPについて,FPLCモノQカラムによるDNA依存性ATPase活性を分離定量する系を用いると,XPC細胞に共通した,核局在性の75K ATP^<ase> Q1の溶出位置の異常が見られ,その酵素もしくは複合する蛋白の異常が示唆された。微小核融合法でXPCを相補する染色体のマッピングを行い,1,2,6,7,8,10,11が現在除外され,染色体同定実験が続行している。(4)ヒト正常cDNAライブラリ-の導入によって,現在XPOを相補するcDNAクロ-ンが得られつつあり,PCR増巾断片を用いてneo発現をするpCD2から再クロ-ニングされつつある。(5)XPの修復欠損や修復因子を解析するために,UV損傷の2量体と(6ー4)産物に対する特異的単クロ-ン抗体を樹立し,XP各群の修復欠損やXPAC遺伝子導入細胞における修復の回復が定量できた。(6)細胞修復因子とプラスミドDNAを用いたin vitro DNA修復系が確立され,再構成系を用いて除去修復の機構や因子の作用が研究できるようになった。(7)日本人XPの中で欧米よりも頻度の高いE群XPには,UV損傷DNAに特異的に結合する蛋白を正常にもつものともたないものが分別され,前者が圧倒的に多い。(8)UV誘発遺伝子突然変異が分子解析され,G:C→A:T変異が主で,塩基配列や損に依存し,変異ホットスポットが検出された.

Xeroderma pigmentosum (XP) has been studied in the following aspects: (1) Xeroderma pigmentosum (XP) has been diagnosed in 85%,13%,4% of cases with Xeroderma pigmentosum (XP) group A<238><116>. (2)Normal XPAC DNA binding to nuclear protein at 40,38K,XPA cells with abnormal mRNA damage, artificial modification of XPAC DNA (3'side modification) and XPA cells with abnormal mRNA damage. (3)C In group XP,FPLC uses Q-factor to isolate and quantify DNA-dependent ATPase activity. In XPC cells, abnormalities in 75K ATP^<ase>Q1 dissolution sites and enzyme complex protein were observed. The microfusion method is used to complement the chromosome sequence of XPC, except for chromosome sequence 1, 2, 6, 7, 8, 10 and 11. (4)The normal cDNA fragment was introduced into the pCD2, but now XPO was added to the cDNA fragment, and PCR fragments were generated using neo. (5)XP The repair defect and repair factor analysis,UV damage of the two quantities and (6 - 4) products against the establishment of specific single-antibody,XP groups of repair defect and XPAC gene introduced into cells to repair the quantitative recovery. (6)Cell repair factors are used in vitro DNA repair systems, and the role of repair factors in reconstitution systems is studied. (7)The frequency of UV damage to DNA is high in E group XP, and the frequency of UV damage to DNA is high. (8)UV The molecular analysis of induced mutation is G:C→A:T mutation.

项目成果

Mori,T.,Nakane,M.,Hattori,T.,Matsunaga,M.and Nikaido,O.: "Simuitaneous establishment of monoclonal antibodies specific for either cyclobutane pyrimidine dimer of (6-4)photoproduct from the same mouse immunized with ultraviolet-irradiated DNA." Photochem.P

Mori,T.、Nakane,M.、Hattori,T.、Matsunaga,M. 和 Nikaido,O.：“同时建立对（6-4）光产物的任一环丁烷嘧啶二聚体具有特异性的单克隆抗体，该抗体来自用

Satokata,L.,Tanaka,K.,Miura,N.et al.: "Three mnonsense mutations responsible for group A xeroderma pigmen osum." Mutation Res.

Satokata,L.、Tanaka,K.、Miura,N.等人：“导致 A 组猪干皮病的三种无义突变。”

Yanagisawa,J.,Seki,M.and Enomoto,T.: "Alteration of a DNA-dependent ATPase activity in xeroderma pigmentosum complementation group C cells." J.Biol.Chem.

Yanagisawa,J.、Seki,M. 和 Enomoto,T.：“着色性干皮病互补组 C 细胞中 DNA 依赖性 ATP 酶活性的改变。”

Kataoka,H. and Fujiwara,Y.: "UV damage specific DNA binding protein in xeroderma pigmentosum complementation group E." Biochem. Biophys. Res. Commun.175. 1139-1143 (1991)

片冈，H.

Miura,N.et al.: "Identification and characterization of xpac potein,the gene product of the human XPAC (eroderma pigmentosum group A complementing) gene." J.Biol.Chem.266. 19786-19789 (1991)

Miura,N.et al.：“xpac 蛋白的鉴定和表征，xpac 蛋白是人类 XPAC（色素性皮炎 A 组互补）基因的基因产物。”