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ヒトDNAミスマッチ修復蛋白質1遺伝子の構造と機能に関する分子生物学的研究

人类DNA错配修复蛋白1基因结构与功能的分子生物学研究

基本信息

批准号：
06263213
负责人：
池島三与子
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Nippon Medical School
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1)MRP1遺伝子のゲノムDNAの単離と構造解析:メソトレキセート耐性HL-60細胞よりゲノムDNAを抽出し、sCos1をベクターとしゲノムライブラリーを作成した。MRP1cDNAをプローブとしてスクリーニングを行ったところ11個の陽性クローンが得られ、MRP1遺伝子のほぼ全域を含んでいた。cDNA中の塩基配列を持つオリゴヌクレオチドをプローブに用い、得られた陽性クローンの配列化を行った。さらに同じオリゴヌクレオチドをプライマーとしてDNA断片のシークエンスを行いエクソン・イントロン接合部を決定した。MRP1遺伝子は24のエクソンよりなり全長160kb以上と推測された(第67回日本生化学会発表)。2)Mutator Assay:MRP1蛋白質とDNA修復との関わりを、MRP1蛋白質を大腸菌で発現させた後のリファンピシン耐性変異率の変化により検討した。MRP1蛋白質のC末側76%、55%、27%をpTrc99Aに組み入れて発現ベクターを作成し、大腸菌にトランスフォーム後の変異率の変動を調べたところ、いずれの発現ベクターを用いた系においても若干の上昇がみられたのみであった。MRP1蛋白質のC末側27%を用いた場合には、発現に伴い大腸菌の成長阻害がみられた。3).MRP1遺伝子と癌との関わり:40例の造血器腫瘍患者の骨髄細胞より得られたRNAを用いてRT-PCR法によりMRP1遺伝子の発現を調べたところ、7例(18%)においては欠如、24例(60%)においては著しい減少がみられた。(第36回日本臨床血液学会発表)。食道癌5例及び腎癌5例を同様に調べたが減少はみられなかった。

1) Isolation and structural analysis of the essential DNA of the MRP1 gene: Mesotreksit tolerates HL-60 cells where essential DNA is extracted and sCos1 is produced. MRP1 cDNA is the most important gene in the human genome. The gene sequence in cDNA is selected from the group consisting of the following: In addition, the DNA fragments were separated from the DNA fragments and the binding part was determined. MRP1 gene is estimated to be more than 160kb in length (67th Japanese Biochemical Society report). 2)Mutator Assay: MRP1 protein and DNA repair related to the development of E. coli, MRP1 protein and resistance to change in the rate of detection 76%, 55%, 27% of MRP1 protein C end was incorporated into pTrc99A to produce the protein, and the rate of variation after Escherichia coli infection was adjusted. MRP1 protein C-terminal 27% of the time, the occurrence of Escherichia coli growth inhibition. 3) MRP1 gene expression was detected in 40 cases of hematopoietic tumors by RT-PCR, 7 cases (18%) by RT-PCR, 24 cases (60%) by RT-PCR. (The 36th Japan Society of Clinical Hematology report). 5 cases of esophageal carcinoma and 5 cases of renal carcinoma were treated with the same method.