ショウジョウバエSxl蛋白質のRNA結合特異性と蛋白質間相互作用

果蝇 Sxl 蛋白的 RNA 结合特异性和蛋白间相互作用

• 批准号: 07250213
• 负责人: 坂本 博
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07250213/
• 关键词: Sxl蛋白質; RNA結合特異性; 蛋白質間相互作用

Sxl蛋白質の特異的結合配列と結合領域の解析Sxl蛋白質のRNA結合に対する下流のAG配列の影響を調べるために部位特異的な変異を導入した結果、実際にSxl蛋白質の結合強度は約半分に低下することが明らかになり、in vitro選択法の有効性が確認された。また、tra遺伝子のSxl結合配列を用いて、Sxl蛋白質のRNA結合能力を担う領域を解析した結果、1)特異的なRNA結合には2個のRNA結合ドメインが両方必要であること、2)RNA結合ドメインの周辺のアミノ末端、カルボキシル末端の領域は必要でないことが明らかになった。Sxl蛋白質と他のスプライシング因子との相互作用Sxl蛋白質の欠失変異体を作製することによって、相互作用に必要な領域を詳細にマッピングした結果、Sxl蛋白質間、またSxl蛋白質と基本スプライシング因子U2AF間の相互作用に関して、1)RNA結合ドメインの存在が必要かつ十分であること、2)これらの蛋白質間相互作用はRNA依存的であることが示唆された。系統進化的比較による自己発現制御領域の解析D. melanogasterとD. subobscuraのSxl遺伝子配列を比較解析することによって、1)雌において選択的にスキップされる第3エキソンの上流および下流のイントロン内部に進化的に見て保存度の高い配列が散在すること、2)これらの配列の内、いくつかにはながいウリジン連続配列が存在すること、3)終止コドンを含む第3エキソン配列の保存度はかなり低いこと、4)tra遺伝子のSxl結合配列との比較から初期にはシス配列と考えられていた第3エキソン直前のウリジンオクタマ-配列はD. subobscuraでは保存されていないこと、などが明らかになった。これらの結果は、Sakamotoら、Horabinらによって示唆されていたSxl遺伝子の自己発現制御におけるイントロン内のウリジン配列の重要性を支持するものであった。

Sxl の specific protein combined with column の と combining field analytical Sxl の rna-binding protein に す seaborne る obscene の AG with column の influence を adjustable べ る た め に site specific な - different を import し た results, be interstate に Sxl protein の bonding strength は about half a low points に す る こ と が Ming ら か に な り, in The efficacy of the 択 method selected by vitro is が confirmed to be された. ま た, tra but 伝 の Sxl combined with column を with い て Sxl の rna-binding protein ability を bear う field analytical し を た results, 1) specific な rna-binding に は 2 の rna-binding ド メ イ ン が struck party necessary で あ る こ と, 2) RNA ド メ イ ン の weeks 辺 の ア ミ ノ end, カ ル ボ キ シ ル は necessary end の field Youdaoplaceholder0 になった とが Ming ら になった になった. Sxl protein と he の ス プ ラ イ シ ン グ factor と の Sxl protein interaction の owe lost - variant を cropping す る こ と に よ っ て, interaction necessary な に を detailed に マ ッ ピ ン グ し た results, between Sxl protein, ま た Sxl protein と basic ス プ ラ イ シ ン グ factor の interaction between U2AF に masato し て, 1) RNA Combining ド メ イ ン の is necessary か が つ very で あ る こ と, 2) こ れ ら の で は RNA dependent of the interaction between protein あ る こ と が in stopping さ れ た. Comparison of system evolution による self-emergence control domain による analysis D. melanogasterとD. Subobscura の Sxl heritage 伝 with sequence を comparative analytic す る こ と に よ っ て, 1) female に お い て sentaku of に ス キ ッ プ さ れ る 3 エ キ ソ ン の upper お よ び obscene の イ ン ト ロ ン internal に evolution に see て save degrees high の い match column が scattered す る こ と, 2) こ れ ら の match within the column の, い く つ か に は な が い ウ リ ジ ン Even 続 match column が exist す る こ と, 3) termination コ ド ン を containing む 3 エ キ ソ ン match column の save degrees は か な り low い こ と, 4) tra but 伝 の Sxl combined with column と の is か ら early に は シ ス match column と exam え ら れ て い た 3 エ キ ソ ン ahead の ウ リ ジ ン オ ク タ は マ - match column D. subobscuraで になった keeps されて な な <s:1> と and な が が が in ら ら になった. こ れ ら の results は, Sakamoto ら, Horabin ら に よ っ て in stopping さ れ て い た Sxl heritage 伝 の his son 発 now suppression に お け る イ ン ト ロ ン within の ウ リ ジ ン match column の importance を support す る も の で あ っ た.

项目成果

Hoshijima, K.: "Transcriptional regulation of the Sex-lethal gene by helix-loop-helix proteins." Nucleic Acids Res.23. 3441-3448 (1995)

Hoshijima, K.：“螺旋-环-螺旋蛋白对性致死基因的转录调节。”

Tanaka, Y.: "Developmental expression pattern of the Caenorhabditis elegans homologue of the Drosophila suppressor of forked gene." DNA Res.2. 143-146 (1995)

Tanaka, Y.：“果蝇分叉基因抑制因子的秀丽隐杆线虫同源物的发育表达模式。”

Takeshima, Y.: "Modulation of in invitro splicing of the upstream intron by modifying an intra-exon sequence which is deleted from the dystrophin gene in dystrophin Kobe." J. Clin. Invest.95. 515-520 (1995)

Takeshima, Y.：“通过修改从肌营养不良蛋白神户的肌营养不良蛋白基因中删除的外显子内序列来调节上游内含子的体外剪接。”