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スプライシングに関与するRNAヘリカーゼ遺伝子のクローニング

参与剪接的RNA解旋酶基因的克隆

基本信息

批准号：
05680593
负责人：
坂本博
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05680593/
关键词：
スプライシング RNAヘリカーゼポリメラーゼ連鎖反応 HeLa細胞

项目摘要

真核生物の遺伝子発現に必須な過程であるスプライシングにおいて、近年その重要性が示唆されつつあるRNAヘリカーゼ遺伝子を哺乳類から分離するために、これまでに知られている酵母などの相同遺伝子の配列を検討し、保存性が高いと思われる領域について種々の合成DNAプライマーを作製した。これらのプライマーを用いて、ヒト培養細胞であるHeLa細胞のメッセンジャーRNAを鋳型として、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)を行った結果、酵母遺伝子と高い相同性を持ったDNA断片を得ることができた。この断片をプローブにして、HeLa細胞のcDNAライブラリーをスクリーニングした結果、複数の異なるクローンを得ることができ、そのうち一つについて全塩基配列を決定した。このヒトRNAヘリカーゼ遺伝子は酵母のスプライシングに関係するヘリカーゼ遺伝子PRP22と非常によく似ていることが判明し、予想通りこの遺伝子を用いて酵母の温度感受性変異株を部分的に相補することも明らかになった。これらの結果から、酵母の系で知られていたヘリカーゼが高等真核生物の系でも同様に存在すること、また高等真核生物においては複数の互いに相同性の高いRNAヘリカーゼがスプライシング反応に関与していることが示唆された。今後は、複数のヘリカーゼが高等真核生物のスプライシング反応においてどのような機能分担を行っているのかについて、別のヒトRNAヘリカーゼ遺伝子の配列を明らかにし、それぞれに対する抗体を作製し、in vitroスプライシング系などを利用して解析していくことが課題となると考えている。

In recent years, the importance of eukaryotic gene discovery has been demonstrated by the importance of RNA isolation from mammals, the identification and conservation of yeast and the alignment of identical genes in the field of synthetic DNA. The DNA fragments of HeLa cells were identified by PCR. This fragment is the result of HeLa cell cDNA translation, and the sequence of the cDNA fragments is determined by the sequence of cDNA fragments. The RNA gene is related to the yeast strain, PRP22 and PRP22, and is very similar to the yeast strain. As a result, yeast and yeast systems are known to exist in higher eukaryotic systems, and higher eukaryotic systems are known to exist in higher eukaryotic systems. In the future, the study on the functional sharing of higher eukaryotic organisms will be carried out in the future, and the allocation of different RNA genes will be clarified and analyzed in the future.