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ショウジョウバエSxl遺伝子における性特異的スプライシング機構

果蝇Sxl基因中的性别特异性剪接机制

基本信息

批准号：
05265216
负责人：
坂本博
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

特異的なRNA配列に結合し、性特異的なスプライシングを誘導するショウジョウバエSxl遺伝子産物をコードするcDNAを、グルタチオントランスフェラーゼ(GST)の下流に連結し、GSTとSxl融合蛋白質大腸菌内で大量発現しアフィニティーカラムによって高度に精製することに成功した。Sxl蛋白質のRNA結合特異性を詳細に調べるために、この融合蛋白質を用いて、ランダムなRNA配列の中からSxl蛋白質に高い親和性をもって結合するRNA配列を選択してくる新しい系を確立した。その結果、Sxl蛋白質はある一定以上のウリジンが連続するRNA配列に特異的に結合するが、その結合強度は必ずしも連続ウリジンの個数と比例しないことをUVクロスリンク実験などから明らかにした。このことは、周辺配列がSxl蛋白質の結合特異性に何らかの影響を与えるものと考えられる。また、性特異的なスプライシング制御においてSxl蛋白質が他のスプライシング因子と相互作用をしている可能性を調べるために、two-hybrid systemと呼ばれる蛋白質間相互作用を解析する系を用いて実験を行った。その結果、Sxl蛋白質は自分自身とホモ二量体を形成すること、また基本的なスプライシング因子であるU2AFと相互作用することを強く示唆する結果を得た。これらの事実から、Sxl蛋白質によるスプライシング制御機構について、新しい検証可能なモデルを創出することができた。

Specific RNA sequences bind to, and sex-specific Sxl fusion proteins are induced, and the downstream linkage of GST and Sxl fusion proteins to cDNA, GST and Sxl fusion products is successfully expressed in large quantities in E. coli. The RNA binding specificity of Sxl protein was carefully adjusted, and the fusion protein was used, and the RNA alignment was selected from the high affinity of Sxl protein. As a result, Sxl protein has more than a certain amount of RNA alignment specific binding, and its binding strength has to be determined by the number and proportion of RNA alignment. The binding specificity of Sxl protein is affected by the alignment of Sxl protein and Sxl protein. Sxl protein is used to modulate the possibility of protein-protein interactions by sex-specific protein regulation and two-hybrid system analysis. As a result, Sxl protein can be separated from itself, and the formation of two quantities can be determined by the basic factor of U2AF interaction. This is the first time that Sxl protein has been detected by a regulatory mechanism.