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海産無脊椎動物由来の生理活性物質を用いた細胞質分裂の解析

使用源自海洋无脊椎动物的生理活性物质分析胞质分裂

基本信息

批准号：
07267202
负责人：
渡部終五
金额：
$ 1.02万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

細胞質分裂には種々のタンパク質が関与するが、この中でもミオシンやアクチンなどの収縮性タンパク質は、収縮環の形成とその機能発現に重要な役割を果たす。本研究では、Theonella属海綿から単離され、アクチン2モルに対して1モル結合して、アクチンの重合阻害をすることが試験管内の反応で明らかにされているビスセオネライドA(bistheonellide-A、BT-A)を用いて、細胞質分裂の機構解明を図った。フィッシャー系ラット胚由来3Y1線維芽細胞クローン1-6の培養は、10%FCSを含むMEM培地中、5%CO_2下、37℃で行った。次に、BT-Aを終濃度0.1μMで2.5×10^4cells/mlの3Y1細胞の培地中に添加して、上記条件下で一定時間培養後、細胞形態の変化を位相差顕微鏡で観察したところ、細胞の形態が大幅に変化することが認められた。これらの細胞をロ-ダミン・ファロイジン染色したところ、アクチンフェラメントからなるストレスファイバーが崩壊していることが明らかとなった。さらに培養を続けることにより、24時間以内に大部分の細胞は2核となったが、細胞質分裂が行われないまま、増殖は停止した。フローサイトメトリー分析で、正常細胞のG1期の核DNA量は細胞1個当たり2Cであったが、上述のようにBT-A処理した細胞では通常の2倍であった。したがって、この多核化現象は、核分裂終了後の細胞質分裂が、BT-Aによって阻害されたことを示唆する。次に、24時間処理した後の細胞からBT-Aを洗い流し、さらに培養を続けた。その結果、細胞形態は数時間後には復元し、20時間後には大部分の細胞は再び単核に戻っていた。フローサイトメトリー分析の結果、再増殖した細胞ではG1期で4C、さらにG2〜M期では8Cとなった。以上の結果は、アクチンフェラメントの形成が、細胞質分裂に必須であることを示唆する。

Cytoplasmic division にはkind 々のタンパク性が关与するが、この中でもミオシンやアクチンThe shrinkage properties and the formation of shrinkage rings are important for the performance of functions. In this study, the sponges of the genus Theonella are separated from each other and are used as sponges.に対して1モル合して、アクチンの coincident obstruction をすることが test inside the tube Anti-bistheonellide-A, BT-A, anti-cytoplasmic division of the mechanism of cytoplasmic division. The フィッシャー system embryos are derived from 3Y1 line dimensional bud cells, and are cultured in クローン1-6 in 10% FCS in MEM culture medium, 5% CO_2, and maintained at 37℃. BT-A was added to the 3Y1 cells at a final concentration of 0.1 μM and 2.5 × 10^4 cells/ml under the above conditions. After culturing for a certain period of time, the changes in cell morphology were observed using a phase contrast microscopy, and the changes in cell morphology were greatly confirmed.これらのcell をロ-ダミン・ファロイジン staining したところ、アクチンフェラメントからなるストレスファイバーが壊していることが明らかとなった. In order to maintain the culture, most of the cells will have 2 nuclei within 24 hours, cytoplasmic division will not proceed, and reproduction will stop.フローサイトメトリー analysis, the amount of nuclear DNA in the G1 phase of normal cells is equivalent to 1 cell 2C treatment, the above-mentioned BT-A treatment treatment of cells is usually 2 times the treatment.したがって, このmultinucleation phenomenon は, cytoplasmic division after the end of nuclear division, BT-A によって hindrance されたことをappearance する. After the 24-hour treatment, the cells were washed and flowed, and the cells were cultured. As a result, the cell shape recovered after a few hours, and most of the cells recovered after 20 hours. The results of analysis of Frozen cells, G1 phase 4C of repopulated cells, and 8C G2~M phase cells. As a result of the above, it is necessary to ensure the formation and formation of cell division and cytoplasmic division.