無酸素下DNA抽出-処理装置による酸化的DNA損傷の解析

使用缺氧 DNA 提取处理设备分析氧化 DNA 损伤

• 批准号: 07272223
• 负责人: 竹内 亨
• 金额: $ 2.56万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07272223/
• 关键词: 活性酸素; 嫌気性培養装置; 酸化的DNA損傷; 8-ヒドロキシデオキシグアノシン; ヒト白血球

酸化的DNA損傷、特に8ヒドロキシデオキシグアノシン(80HdG)は発がん要因として重要な位置を占めている。しかし80HdG測定には大きな測定誤差が発生し、測定機関により80HdG値が著しく異なり、80HdGの比較検討が困難であった。試料処理時に存在する酸素が、測定誤差を産む第一の原因と考えられたので、本研究では無酸素下で資料処理し、80HdGを測定する方法の開発を試みた。室内で好気的に(aero)あるいは嫌気性培養装置内(anaero)で、細胞よりDNAを抽出・分解後、HPLCで分離し、電気化学検出器で80HaGを測定した。DMSO-HL60細胞はPMA刺激により、Zero,anaero測定法とも、80HaG量の増加が認められた。しかし、anaroの方が、80HdGの増加率が顕著で、しかも測定誤差が少なかった。PMA-HL60細胞はアスベスト添加で80HdGが増加したが、aeroでは、アスベスト添加対照群(80HdG測定時にアスベストを添加したもの)でも 80HdG値の著明な増加が認められた。一方anaeroでは、アスベスト添加対照群での80HdG増加は少なく、酸素存在下、アスベストが飼料処理過程で賢明なartifactを生み出していることが判った。すなわちanaeroではartifactの生成を著明に抑制した。一方aeroでは末梢血単核球並が多型核白血球とも80HdG値が1.0で、両細胞間に80Hdg量の差が検出できなかった。ヒトanaeroでは80HdG値が、単核球で0.188多型核白血球で0.241となり、両細胞間の80HdG量に有意な差があることが判った。同一試料を2つに分け保存し、測定日を変え2度測定したところ、aeroでは2度の測定値間に有意の相関が認められなかったが、anaeroでは、2度の測定値間で有意の正相関が認められた。嫌気性培養装置内で試料処理を行うことにより、80HdG測定におけるartifactを著明に減少でき、再現性の良い測定系を確立する事ができた。

Acidified DNA damage, especially 8-D DNA damage (80HdG), is responsible for important sites. 80HdG measurement error is large, measurement mechanism is different, 80 HdG comparison is difficult The first reason for the existence of acid in sample processing and measurement error was investigated. In this study, the development of data processing and 80HdG measurement method without acid was tried. In the laboratory, the DNA was extracted and decomposed, separated by HPLC, and measured by an electrical chemical detector. DMSO-HL60 cells were stimulated by PMA, and the amount of 80G was increased by Zero,anaero assay. The increase rate of 80HdG is very small, and the measurement error is very small. PMA-HL60 cells were added to the 80HdG assay and the 80 HdG assay was added to the 80 HdG assay. A side anaero is added to the group of 80HdG to increase the amount of acid in the presence of acid, and the feed treatment process is wise. artifact is produced. The creation of artifacts is clearly inhibited. A square aero has a peripheral blood mononuclear cell and a polymorphic leukocyte. The 80HdG value is 1.0. The difference between the 80Hdg amount of the cells is 1.0.ヒトanaeroでは80HdG値が、単核球で0.188多型核白血球で0.241となり、両细胞间の80HdG量に有意な差があることが判った。The same sample is stored in 2 minutes, the measurement date is changed to 2 degrees, the aero is changed to 2 degrees, the measurement value is changed to 2 degrees, the intentional correlation is changed to 2 degrees, the aero is changed to 2 degrees, the measurement value is changed to 2 degrees, the intentional positive correlation is changed to 2 degrees. Sample processing in the anaerobic culture apparatus is performed to reduce artifacts and establish a good measurement system for reproducibility.

项目成果

Nakajima,M. et al.: "Determination of 8-hydroxy deoxyguanosine in huma cells ander cxygen-tree condition." carcinogenesis. (印刷中).

Nakajima, M. 等人：“人细胞中 8-羟基脱氧鸟苷的测定和 cxygen-tree 条件”（正在出版）。

Takeshita,T. et al.: "Effects of geretic polymorphisms in alcohol-mefabol・zing en 2ymes on alcohol hyperssensitivity and alcohol-related health problems in orientals" Environmental Health and Preventive Medicine. (印刷中).

Takeshita, T. 等人：“酒精代谢酶 2ymes 中的老年多态性对东方人酒精过敏和酒精相关健康问题的影响”环境健康和预防医学（出版中）。

Morimoto,K. et al.: "Low km Aldehyde dehy droge nace(ALDH2)polymorphism,alcohol-drinking behavior and chromosome ulterations in Peripheral lympho cytes" Environmental Health Perspe ctiues. (印刷中).

Morimoto, K. 等人：“低公里醛脱氢酶 (ALDH2) 多态性、饮酒行为和外周淋巴细胞中的染色体突变”环境健康展望（正在出版）。

Takeshita,T. et al.: "The contribution of p・ymorphism in the alcohol dehydrogenase P subunit to alcohol sensitivity in a Japanese popula fion" Human Genetics. (印刷中).

Takeshita, T. 等人：“乙醇脱氢酶 P 亚基的多态性对日本人群酒精敏感性的贡献”《人类遗传学》（出版中）。

Ogura,H. et al.: "A comparison of the 8-hy droxy deoxy gnanosine,chromosome aberrations and micronoclens techniqnes for the assessment of the genotox: city of mercury compoands in human bloodlymphocyfes" Mutation Research. (印刷中).

Ogura, H. 等人：“用于评估基因毒素的 8-羟基脱氧甘露糖苷、染色体畸变和微核技术的比较：人类血液淋巴细胞中的汞化合物”突变研究（正在出版）。