HIV-2のヌクレオチキャプシドタンパクのウイルスRNA結合能の解析

HIV-2核衣壳蛋白的病毒RNA结合能力分析

• 批准号: 07277221
• 负责人: 小松 博義
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: Kitasato University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07277221/
• 关键词: HIV; Znフィンガー; ヌクオレキャプシドプロテイン; Primer Binding Site

我々は次の2つの作業仮説をたてた。(1)ヌクレオキャプシド(NC)タンパク由来の部分ペプチドをHIV感染細胞中で発現させると、ネイティブなNCタンパクのウイルスRNAとの結合能が競合的に阻害され、ウイルスRNAのパッケージングを抑制することができるであろう。(2)ネイティブなNCタンパクの配列を除き、代わりに特異的結合能を消失させた変異NCタンパクを挿入したGag前駆体タンパク(変異Gag前駆体タンパク)発現細胞にウイルスを感染させると、産生されるウイルスには量比で圧倒的に多いと考えられる宿主細胞由来のRNAをパッケージングさせることができるであろう。本研究では、上記の仮説を検証することを目的としている。そこで、今年度は、ウイルスRNA及び非特異RNAとNCタンパクとの結合性から、その特異性を解析し、上記変異タンパクのデザイン決定を行いたい。以下に現在までの研究の進展状況を述べる。1.HIV-2のPrimer binding site(PBS)、Packaging Signal(PSI)及びgag(PBS及びPSIを含む)領域に相当する^<32>P標識ウイルスRNAをin vitro-synthesis法で作製し、NCタンパクの部分合成ペプチドとの結合性をUVクロスリンキング法を用いて検討した。その結果、gag領域RNAとNCタンパクの両zinc finger motif(ZFM)に相当するペプチドとの結合には特異性が認められた。更に、PSI領域とNCタンパクとの結合にも特性が認められた。また、Gag前駆体を用いることにより、各領域RNAとの結合の特異性が上昇するかどうか検討中である。新たな取り組みとしては、NCタンパクの宿主細胞内でのプロテアーゼに対する安定性を検討するために、タンパク分解酵素を含むと考えられる細胞抽出液でNCタンパクの部分合成ペプチドを処理し、ペプチドシークエンサーによりNCタンパク分子上のクリベ-ジ部位を同定した。この研究は、細胞内で発現させた変異NCタンパクの安定性を増強させるための基礎検討として行ったが、更に踏み込んで、ウイルスRNAへのNCタンパクの結合による逆転写阻害について検討中である。また、この研究の結果をまとめた論文の投稿を準備している。

I'm not going to do this again. (1)Some of the genes from which the virus originated were found in HIV-infected cells, and the binding energy between the virus and the RNA was inhibited. (2)The specific binding energy of the host cell is reduced and the host cell derived RNA is reduced. The purpose of this study is to prove the relationship between the two. This year's RNA and non-specific RNA are analyzed for specificity, and the determination of specificity is carried out. The present status of the research is described below. 1. HIV-2 Primer binding site(PBS), Packaging Signal(PSI) and tag (PBS and PSI both inclusive) domains are equivalent to the identification of HIV-<32>2 RNA in vitro-synthesis method, NC system, partial synthesis, binding and UV system. As a result, gag domain RNA and zinc finger motif(ZFM) are equivalent to the binding specificity. In addition, PSI domain and NC domain are combined with each other. The specificity of RNA binding in each domain increased. The stability of the host cells in which the new group was selected was studied. The enzyme content in the cell extract was examined. The partial synthesis of the NC group was studied. The position of the protein on the NC group molecule was determined. This study is aimed at enhancing the stability of cellular RNA and enhancing the stability of cellular RNA. The results of this research are prepared for submission.

项目成果

Komatsu H.: "Viral RNA binding properties of human immunodeficiency virus type-2(HIV-2)nucleocapsid protein-derived synthetic peptides" Biochemistry and Molecular Biology International. 36(発表予定). (1996)

Komatsu H.：“人类免疫缺陷病毒 2 型 (HIV-2) 核衣壳蛋白衍生的合成肽的病毒 RNA 结合特性”，《国际生物化学和分子生物学》36（即将发表）。