細胞周期における核構造-染色体間のダイナミックスの解析

细胞周期过程中核结构和染色体间动力学分析

• 批准号: 07282214
• 负责人: 土屋 英子
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07282214/
• 关键词: 核蛋白; S.cerevisiae; NPS1; 細胞周期; 減数分裂

1.研究目的:出芽酵母の核マトリックス蛋白Nps1pは分子量約160KのG2/M期の進行に必須な蛋白である。本蛋白は、中央部分にヌクレオソームのリモデリングに働くことが明らかにされたSnf2pと相同性の高い領域を、C末部分に、DNA結合能を示す領域を持つ。細胞周期のG2/M期には、染色体の大きな高次構造変化が起こると考えられ、我々は、本蛋白が、染色体の特定部位でのヌクレオソームのリモデリング、あるいはその他の核蛋白との相互作用を通じて、この過程に働いていると予想している。本研究は、Nps1pの機能解析、Nps1pと相互作用する核蛋白の同定と機能解析、ならびにこれら蛋白の核内局材部位の視覚化とその細胞周期における動態を解析する事により、核構造と染色体間の機能的関連を理解するための手がかりを得る事を目的とする。2.研究成果:Nps1pと相互作用する核蛋白の同定のため、本蛋白の多量発現に依存して生育阻害を受ける変異株を分離し、これを相補する遺伝子をクローニングした。解析の結果、この遺伝子NPS2は分子量約180Kの核蛋白をコードし、本遺伝子の破壊株は温度感受性、UV,MMS,hydozyurea感受性、胞子形成不能等、多様な形質を示すことを見いだした。特に、破壊株は減数分裂過程において、2回の核分裂の後、核領域の分散が起こって死滅する事から、Nps2pも核の高次構造維持に働くと予測された。Nps1pとNps2pの相互作用をしらべるため、two hybridsystemにより解析を行った結果、両蛋白間には直接の相互作用はないが、Nps1pは何らの転写因子と結合し得る事、この結合をNps2pが細胞周期依存的に調節している事を示すデータが得られた。以上の結果より、Nps1pはDNAや転写因子との結合、Nps2pは核構造の維持によって核機能の発現に働いていると考えられる。現在、これら2つの蛋白の、細胞周期および減数分裂過程における核内局在部位の変動の解析と、Nps1pと結合する転写因子のクローニングを行っている。

1. Objective: Nps1p protein of budding yeast has a molecular weight of about 160K and is essential for G2/M phase. The protein has a high affinity for Snf2p in the central portion, a high affinity for DNA binding in the terminal portion, and a high affinity for DNA binding in the central portion. In the G2/M phase of the cell cycle, large and high-order structural changes in chromosomes occur, and the interaction of this protein with other nuclear proteins occurs in specific parts of chromosomes. The purpose of this study is to elucidate the function of Nps1p, the identity and function of nuclear proteins interacting with Nps1p, the visualization and dynamics of nuclear proteins, and the functional relationships between chromosomes in nuclear architecture. 2. Research results: Nps1p interaction, nuclear protein identity, protein production, fertility resistance, plant isolation, complement, gene expression The results of analysis showed that NPS2 was a nuclear protein with molecular weight of about 180K, and its temperature sensitivity, UV,MMS,hydozyurea sensitivity, spore formation inability, and various morphological characteristics were shown. The process of meiosis, post-mitosis, nuclear domain dispersion, and higher-order nuclear structure maintenance were predicted. The interaction between Nps1 p and Nps2 p is analyzed as a result of direct interaction between proteins, and the interaction between Nps1 p and Nps2 p is characterized by cell cycle dependent regulation. These results indicate that Nps1 p is a DNA binding factor and Nps2 p is a DNA binding factor. Now, these 2 proteins, cell cycle and meiosis process, the analysis of nuclear internal position, Nps1p and binding, write factors, and the process of change.

项目成果

Hemmi, K. et. al.: "The physiological roles of membrane ergosterol as revealed by the phenotvpes of syr1/erg3 null mutant of Saccharomyces cerevisiae." Biosci. Biotech. Biochem.56. 482-486 (1995)

海米，K.等。

Farcasanu, I. C. et. al.: "Protein phosphatase 2B of Sacharomyces cerevisiae is required for tolerance to manganase, in blocking the entry of ions into the cells." Eur. J. Biochem. 232. 712-717 (1995)

Farcasanu，I.C. 等。

Tsuchiya, E. et. al.: "The Saccharomyces serevisiae SSD1 gene is involved in the tolerance to high concentration of Ca with the participation of HST1/NRC1/BRF1." Gene. (印刷中). (1996)

Tsuchiya, E. 等人：“酿酒酵母 SSD1 基因在 HST1/NRC1/BRF1 的参与下参与了对高浓度 Ca 的耐受（正在出版）。”