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チトクロムbc型NOリダクターゼによるNOの変換機構

细胞色素bc型NO还原酶转化NO的机制

基本信息

批准号：
08249214
负责人：
櫻井武
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Okazaki National Research Institutes
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08249214/
关键词：
NO NOリダクターゼチトクロム ESR MCD 膜タンパクコンプレックスレドックス

项目摘要

Al cali genes xylosoxi dans GIFU 1051 を嫌気条件で培養し、膜成分をドデシルマルトシドで処理することによって、可溶化したのち、DEAEセルロース、ヒドロキシアパタイト、セファデックスなどを用いたカラムクロマトを行うことによって、NOリダクターゼを単離した。酵素活性の検出はガスクロを用いる方法を開発して、酵素精製を行った。次いで、吸収、MCD、ESRスペクトルなどを測定することによって、NOリダクターゼをキャラクタライズした。その結果、この酵素はチトクロムbサブユニットとチトクロムcサブユニットのコンプレックスであることがわかった。さらに、ヘムの電子状態として、高スピンと低スピンの成分があることを明らかにした。ついで、NOリダクターゼのレドックスカップルであると考えられる、可溶性タンパク、チトクロムc553を単離して、吸収、MCD、ESRスペクトルなどによって、ヘムの電子状態について詳しく検討した。このような研究によりAl cali genes xylosoxidans GIFU 1051 にNOリダクターゼが存在することを確認し、基本的なキャラクタリゼーションを行ったが、この酵素が著しく不安定であるので、より詳細な研究を進めるために、大量に安定な酵素を得ることをめざして、様々の脱窒菌をスクリーニングテストした。その結果、Par acoccus hal odenifitricansが最適であることを突き止め、精製法を確立した。また、Al cali genes xylosoxi dans GIFU 1051 と同じレベルの分光学的キャラクタリゼーションを行った。現在、ゲノムクローニングを目指して、ペプチドシーケンスを部分的に調べているところである。

Al cali genes xylosoxi dans GIFU 1051を気conditioned culture し, membrane component をドデシルマルトシドで treatment することによって, solubilization したのち, DEAE セルロース, ヒドロキシアパタイト、セファデックスなどを用いたカラムクロマトを行うことによって, NOリダクターゼを単里した. Enzyme activity is determined by using the enzyme method and enzyme refining method. Submersible, absorption, MCD, ESR スペクトルなどをmeasurement することによって, NOリダクターゼをキャラクタライズした.そのRESULTS、このENzymeムcサブユニットのコンプレックスであることがわかった.さらに, ヘムのelectronic state として, high スピンとlow スピンのcomponent があることを明らかにした.ついで、NOリダクターゼのレドックスカップルであると卡えられる、soluble タンパク、チトクロムc55 3を単利して, absorption, MCD, ESRスペクトルなどによって, ヘムのelectronic state について detail しく検した.このような Research on Al cali genes xylosoxidans GIFU 1051にNOリダクターゼがexistent することをconfirmationし、Basic なキャラクタリゼーションを行ったが, このzyme が出しく unstable であるので、よりDetailed researchをAdvancedめるために、A large number of stable enzymes were obtainedることをめざして, 様々の出suffocation bacteria をスクリーニングテストした.そのRESULTS、Par acoccus hal odenifitricansがoptimalであることをprotrusionきstopめ、Refining methodをestablishedした.また、Al cali genes Now, the ゲノムクローニングを目 refers to the して and the ペプチドシーケンスを part of the に调べているところである.