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酸素の活性化や活性酸素の無毒化を行なう銅含有酵素の触媒反応

含铜酶的催化反应，活化氧并解毒活性氧

基本信息

批准号：
01F00252
负责人：
櫻井武
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

平成14年度の研究において肝機能の臨床検査薬として利用されている不完全糸状菌Myrothecium verrucaria由来のビリルビンオキシダーゼの組換え体は天然型酵素と異なるフォームで発現していることを明らかにしたが,このフォームについてさらに詳しく検討した。その結果,タイプ2銅とタイプ3銅からなる三核銅部位において,水酸基がタイプ2銅と一方のタイプ3銅との間で架橋していることがわかった。あるいはこれらが還元された状態にあり,もう一つのタイプ3銅が磁気的に孤立してESRスペクトルで検出されていることがわかった。このESRシグナルは低分子系では観測されたことにない極めて異常なCu(II)由来のシグナルである。このような休止状態の相違にもかかわらず,組換え体は,天然型酵素と同様の反応を行い,酸素還元種が観測できることがわかった。また,反応のターンオーバーが一回完結すると,組換え体の酸素還元部位は天然型酵素と同じ状態に至ることがわかった。すなわち,休止状態の三核銅部位は,酵素反応中には存在しないフォームで存在していることがわかった。一方,ビリルビンオキシダーゼのミュータントを数種類作成した。タイプ1銅に配位したMetをGlnに変異させたところ,天然型酵素の反応では観測するのが困難な酸素還元種が容易に検出されることを見出したが,時間の関係上,予備データの取得にとどまった。また,マルチ銅オキシダーゼで保存されているAspが酸素還元種へのプロトンソースであると予測し,このアミノ酸のAla変異体を作成したところ,非配位性アミノ酸であるにも関わらず,三核銅部位には,平均1個しか銅が入らないことがわかった。この事実から,このAsp残基は酸素還元だけではなく酸素還元部位の構造形成にも重要であることがわかった。

In the study of Heisei 14, clinical examination of liver function was carried out. The origin of incomplete Myrothecium verrucaria was investigated. The results showed that the natural enzyme variant was found in the study. As a result, the tri-nuclear copper site is bridged by the aqueous acid group. In the case of the magnetic field, the ESR is isolated. The ESR of Cu(II) is a low molecular weight system. The enzyme is not active, the enzyme is not active, the enzyme is active. The enzyme is a natural enzyme in the body. In the resting state, the three nuclear copper sites are not present, and the enzyme reaction is not present. On the other hand, there are several kinds of products that can be produced in the future. The natural enzyme is easy to detect, and the time to detect is important. In addition to the above, the present invention also provides a method for determining the concentration of Asp in the tri-nuclear copper site. The Asp residue is important for the formation of the structure of the acid-reducing site.