標的遺伝子組換えによる変異マウスを用いたリンパ球シグナル伝達の研究

靶向基因重组突变小鼠淋巴细胞信号转导研究

• 批准号: 08252209
• 负责人: 北村 大介
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Tokyo University of Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08252209/
• 关键词: 抗原受容体; シグナル伝達; リンパ球分化; アポトーシス; 非受容体型チロシンキナーゼ; HS1; Lyn; ノックアウトマウス

1, 抗原受容体からのシグナルは、成熟リンパ球細胞においては活性化を、未熟リンパ球細胞においてはアポトーシスを引き起こす。この2つの異なる細胞反応を決定するシグナル伝達機構を解明するために、本研究では標的組み換えによる遺伝子変異マウスを解析した。抗原受容体シグナル伝達に重要な役割を果たすLyn,Fyn,Syk等の非受容体型チロシンキナーゼ(PTK)の細胞内基質であるHS1の欠損マウスでは、sIgM架橋による腹腔B細胞のアポトーシス誘導と胸腺T細胞のアポトーシスによる陰性選択が不完全なことが明らかになった。よってHS1蛋白はBおよびT細胞において抗原受容体からのアポトーシスを誘導するシグナル伝達の少なくとも一部を担っていることが示された。一方、Lyn遺伝子ノックアウトマウスでは、抗IgM抗体刺激によるHS1やその他のPTKの細胞内基質蛋白のチロシンリン酸化が著減していた。リンパ芽球様細胞およびプラズマ細胞の異常増加と脾臓リンパ節の腫大、血中抗体価の異常高値、自己抗体および自己免疫性腎病変などの異常が観察された。従ってLynは自己反応性B細胞の陰性選択とB細胞の最終分化の制御に重要な役割を果たしている考えられた。2, アポトーシス誘導シグナルに関わる新たな経路を解明するために、抗原受容体架橋によりアポトーシスに陥るB細胞WEHI-231とその耐性変異株との間でcDNAサブトラクション法を行い、耐性株において発現の欠損する新規遺伝子cDNAを単離した。また、HS1の作用機序解明のために、two hybrid法によりHS1結合蛋白の遺伝子cDNAを同定した。今後、これらの遺伝子の生理機能を標的組換え法により解明したい。さらに現在、抗原受容体シグナルの標的と考えられるc-myc遺伝子の組織特異的・誘導性ノックアウトマウスの作製を進めている。これらの変異マウスの解析を通して、リンパ球アポトーシスを誘導する抗原受容体シグナル経路を分子レベルで解明したい。

1. Antigen receptors are activated in mature and immature cells. 2. The analysis of cell diversity in response to cell diversity in this study Antigen receptor system is an important part of the intracellular matrix of non-receptor type PTK, such as Lyn,Fyn,Syk, etc., which is deficient in HS1. It can be used as a bridge to induce the apoptosis of peritoneal B cells and the apoptosis of thymic T cells. Hs1 protein is a protein that can be induced in T cells and can be expressed in a variety of ways. In addition, Lyn's protein expression was reduced by the stimulation of HS1 and other PTK intracellular matrix proteins by anti-IgM antibodies. The abnormal increase of the cells, the enlargement of the spleen, the abnormal high level of the antibody in the blood, the abnormal increase of the antibody in the kidney and the abnormal increase of the immune kidney were observed. Lyn's negative selection of B cells and the regulation of B cell terminal differentiation are important factors in the development of B cells. 2. The expression of cDNA in WEHI-231 and its resistant variant strains was detected by cDNA expression method, and the expression of cDNA in the resistant variant strains was detected by cDNA expression method. The sequence of HS1 binding protein was determined by two hybrid method. In the future, the physiological function of the gene will be changed. In addition, the expression of c-myc protein is related to the expression of c-myc protein. The analysis of the different proteins in the antigen receptor system was carried out by means of molecular analysis.

项目成果

Yamanashi,Y.: "Role of tyrosine phosphorylation of HS1 in B cell antigen receptor-mediated apoptosis" J.Exp.Med.in press.

Yamanashi,Y.：“HS1 酪氨酸磷酸化在 B 细胞抗原受体介导的细胞凋亡中的作用”J.Exp.Med.in press。

Benhamou,L.E.: "Signaling properties of anti-immunoglobulin resistant variants of WEHI-231 B lymphoma cells." Eur.J.Immunol.24. 1993-1999 (1994)

Benhamou, L.E.：“WEHI-231 B 淋巴瘤细胞的抗免疫球蛋白耐药变体的信号特性。”

Egashira,M.: "The human HCLS1 gene maps to chromosome 3q13 by fluorescence in situ hybridization." Cytogenet.Cell Genet.72. 175-176 (1996)

Egashira,M.：“通过荧光原位杂交将人类 HCLS1 基因定位到染色体 3q13。”

Taniuchi,I.: "Antigen-receptor induced clonal expansion and deletion of lymphocytes are impaired in mice lacking HS1 protein,a substrate of the antigen-receptor-coupled tyrosine kinase." EMBOJ.14. 3664-3678 (1995)

Taniuchi,I.：“在缺乏 HS1 蛋白（抗原受体偶联酪氨酸激酶的底物）的小鼠中，抗原受体诱导的淋巴细胞克隆扩增和缺失受到损害。”

Zeng,H.: "Phosphorylation of HS1,GAP-associated p190 and a novel GAP-associated p60 protein by cross-linking of FcγRIIIA." J.Biochem.118. 1166-1174 (1995)

Zeng, H.：“通过 FcγRIIIA 交联对 HS1、GAP 相关 p190 和新型 GAP 相关 p60 蛋白进行磷酸化。J.Biochem.1166-1174 (1995)。