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新しいゲノム・サブトラクション法を用いたがん抑制遺伝子の探索

使用新的基因组消减方法寻找抑癌基因

基本信息

批准号：
08265217
负责人：
木山亮一
金额：
$ 2.11万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の目的は新しいゲノムサブトラクション法であるIn-gel competitive reassociation(IGCR)法を用いてがん抑制遺伝子の単離・同定を行なうものである。本年度は、計画として当初予定していた様に腎がん組織のDNAを用いてIGCR法によりLOH部位の濃縮を検討した。腎がん患者2例より腎がん組織と正常組織を得、ゲノムDNAを抽出した後、IGCR法を用いてサブトラクションを行なった後、両組織間で異なるDNA断片を含むクローンのライブラリーを構築した。それぞれのライブラリーについてクローンを用いてサザンハイブリダイゼーションを行ったところ、確かに両者で異なるパターンを示すクローンが得られていた。約800個のクローンについてさらに詳しく解析を行なった結果、これらのライブラリーのcomplexityは約3×10^4であり、クローンの35〜77%がLOHを示した。また、LOHは反復配列を含むクローンでも見られ、本方法が反復配列を含む多くのDNA断片に適用可能であることが改めて確認された。また、正常組織由来のDNAの混入率をマイクロサテライトDNAの多型を利用して調べたところ、混入はほぼ無いことが確認できた。以上の結果より我々の構築したライブラリーが有用であるとの確証を得たので、それぞれのクローンについてヒト/マウス雑種細胞由来のDNAを用いて染色体マッピングを行ないクローンの由来したDNA断片について染色体座位に特異性がないかを検討している。

The purpose of this study is to develop a new method for In-gel competitive reassociation(IGCR), which can be used to inhibit the separation and identity of genetic diversity. This year, we plan to use IGCR method to concentrate the DNA of kidney tissue. In 2 cases of kidney disease, DNA fragments were isolated from normal kidney tissues and constructed by IGCR method. All right, well, let's just say we've got to get to the bottom of this. About 800 samples were analyzed in detail. The results showed that the complexity of the samples was about 3×10^4, and 35 ~ 77% of the samples were LOH. This method is applicable to repeated alignment of DNA fragments. DNA from normal tissues is mixed with DNA from normal tissues. DNA from normal tissues is mixed with DNA from normal tissues. The above results show that the construction of DNA fragments is useful, and the identification of DNA fragments is useful.