リボサイムを用いた腫瘍細胞上補体制御膜因子の不活化による免疫原性の増強

使用核糖酶灭活肿瘤细胞上的补体调节膜因子来增强免疫原性

• 批准号: 08266259
• 负责人: 岡田 則子
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Nagoya City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08266259/
• 关键词: リボザイム; 5I2抗原; 補体制御膜因子; 腫瘍細胞; DAF; MCP; 補体反応

1。ラットの種特異的補体制御膜因子である5I2抗原を発見し、そのcDNAもクローニングすることができたので、腫瘍細胞膜上への5I2抗原の発現を抑制し、自己(同種)補体の反応を許すようにさせる方法して、5I2抗原の遺伝子を特異的に攻撃するリボザイムの開発を試みた。5I2抗原のcDNAの塩基配列を解析し、ハンマーヘッド型のリボザイムの標的とするのに適当と考えられる塩基配列を探索した。それに基づきリボザイムの合成を行った。5I2抗原cDNAのin vitro transcriptを作り、このリボザイムを作用させたところtranscriptのmRNAを特異的に切断することが確かめられた。2。マウスのDAF (decay accelerating factor)のcDNAもクローニングすることができたので、発現組織についての検討を行ったが、精巣に強い発現が認められた。モルモットのMCP (membrane cofactor protein)のcDNAもクローニングし、その発現組織を検討したが、この場合には、より強い精巣への限局が認められた。一方、マウスの腫瘍細胞を用いて解析するため、マウスの強力な補体制御膜因子であるCnyに対するモノクローナル抗体を用いて腫瘍細胞膜上のCrryの機能をブロックしたときの補体反応性の解析を行った。その結果、Crryをブロックするだけでは不十分で、腫瘍細胞に対するIgM抗体などの反応を起こさせると強い補体反応を起こし、C3の沈着等を起こせることが分かった。3。5I2抗原リボザイムは、in vitroのtranscriptを特異的に切断するので腫瘍細胞の細胞内で作用させて、5I2抗原蛋白の細胞膜への発現をどの程度まで抑制するかを検討中である。

1。The expression of 5I2 antigen on tumor cell membrane was inhibited by cDNA translation, and the development of 5I2 antigen was tested by cDNA translation. Analysis of 5I2 antigen cDNA motif alignment, identification of the motif type, and identification of the motif alignment The basic structure of the system is composed of two parts: 5I2 antigen cDNA in vitro transcription function, transcription function 2。The cDNA of DAF (decay accelerating factor) is used to detect and detect the expression of DNA. The cDNA sequence of MCP (membrane cofactor protein) was analyzed and analyzed in this paper. The function of Crry on the tumor cell membrane was analyzed by using anti-tumor antibody. Results: Cryogenic acid, IgM antibody, C3 antibody, IgM antibody, C3 antibody, IgM antibody, IgM antibody, C3 antibody, IgM antibody, 3。5I2 antigen protein expression in vitro transcription specific cleavage of tumor cells intracellular action, 5I2 antigen protein expression in the cell membrane inhibition of the extent of the study

项目成果

Fukuoka, Y.: "Molecular cloning of murine decay accelerating factor (DAF) by immunoscreening." Int. Immunol.8. 379-385 (1996)

Fukuoka, Y.：“通过免疫筛选对小鼠腐烂加速因子 (DAF) 进行分子克隆。”

Hosokawa, M.: "Molecular cloning of guinea pig membrane cofactor protein (MCP) : Preferential expression in testis." J. Immunol.157. 4946-4952 (1996)

Hosokawa, M.：“豚鼠膜辅因子蛋白 (MCP) 的分子克隆：在睾丸中优先表达。”

Rogers, C. A.: "Expression and function of membrane regulators of complement on rat astrocytes in culture." Immunology. 88. 153-161 (1996)

Rogers，C.A.：“培养物中大鼠星形胶质细胞补体膜调节因子的表达和功能。”

Iwata, M.: "Complement plays an essential role in shock following intestinal ischaemia in rats." Clin. Exp. Immunol.106. 156-159 (1996)

Iwata, M.：“补体在大鼠肠道缺血后的休克中发挥着重要作用。”

Nakamura,M.: "Quantification of the CD55 and CD59,membrane inhibitors of complement on HIV-1 particles as a function of complement-mediated virolysis." Microbiol Immunol.40. 561-567 (1996)

Nakamura,M.：“HIV-1 颗粒上补体膜抑制剂 CD55 和 CD59 的定量，作为补体介导的病毒解离的函数。”