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ラット及びモルモットの種特異的補体制御膜因子遺伝子導入による異種移植反応の制御

通过将物种特异性补体调节膜因子基因引入大鼠和豚鼠来控制异种移植反应

基本信息

批准号：
08670261
负责人：
岡田則子
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Nagoya City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08670261/
关键词：
補体制御因子ラットCrry DAF MCP 補体反応トランスフェクタント異種移植

项目摘要

1 異種細胞には自由に補体反応が起こるので、異種移植などでは補体による超急性拒否反応がおこる。ヒトのDAF, MCP及びHRF20 (CD59)の遺伝子をブタに導入したトランスジェニックブタの作成が試みられている。ヒトの補体制御膜因子をブタに発現させれば、このブタの皮膚や臓器をヒトに移植しても補体反応は起こらないと期待できるからである。しかし、ヒトへの異種移植用トランスジェニック動物の実用化に当たっては、動物実験による基礎研究の知見が必要である。2 実験動物の種特異的補体制御膜因子としてラット5I2抗原(ラットCrry)につづいて、モルモットDAF、モルモットMCP及びマウスDAFのcDNAクローニングにも成功したので、ハムスター由来CHO細胞、サル由来COS7細胞等にこれらの種特異的補体制御膜因子のcDNAをトランスフェクトしてトランスフェクタントを作成した。トランスフェクタントでの補体制御膜因子cDNAの転写発現量をノーザンブロッド法や半定量RT-PCR法で測定して確認した。細胞膜上への蛋白発現量はモノクローナル抗体を用いて免疫蛍光染色し、フローサイトメトリーにて定量した。発現させたラットCrryやモルモットDAFが種特異的に補体反応を抑制する程度を、それぞれのトランスフェクタント細胞にウサギで作成した抗CHO等の抗体を作用させた後、ラットやモルモットの血清と反応させ、C3の沈着がトランスフェクタント細胞では強力に抑制されていることを確認した。C3の沈着はFITC標識抗C3を用いて蛍光染色し、フローサイトメトリーで定量した。3ラットやモルモットの補体の反応を強力に抑制することを確認した培養細胞をラットやモルモット皮下、腎被膜下、肝臓等に接種して、その移植トランスフェクタント細胞の消長の継時的解析をそれぞれに対する抗体で免疫染色して検討中である。

There are more than 1 kinds of free drugs, and several kinds of transplant models are in response to ultra-acute refusals. Please check DAF, MCP and HRF20 (CD59) for each other, so that you can make sure that you do not know what to do. In the system, the membrane factor is very important, so that you can see that there is a problem in the system, and that the transplant device is in good condition. It is necessary to use the basic research on the use of animal materials in the field of animal transplantation. 2. The systemic membrane factor (Crry), antigen 5I2 (antigen 5I2), antigens (DAFs), antigens (MCP) and antigens (Dafs) of the animals were detected. The CHO cells were successfully expressed in the cells of the CHO cells. The origin of the COS7 cell and so on, the special system membrane factor, the cDNA membrane factor, the membrane factor, the membrane factor and the membrane factor. The membrane factor cDNA was determined by semi-quantitative RT-PCR method. The amount of protein on the cell membrane was measured and the antibody was detected by immuno-light staining and immunostaining. In this study, we detected the degree of inhibition of the specific antibody against Crry, the level of inhibition, the degree of inhibition, the formation of antibodies against CHO and other antibodies, the response of serum and C3, the strength of the cell, the strength of the cell, and the confirmation. C3 sedimentation FITC tag anti-C3 is stained with light staining, and quantitative measurement is performed. 3. Cell culture was used to confirm that the cells were grafted under the skin, under the capsule, in the liver, and so on. When the cells grew and declined, the cells were analyzed during the growth and decline of the cells.