種特異的補体制御膜因子遺伝子導入による異種移植反応の制御

通过物种特异性补体调节膜因子基因转移控制异种移植反应

• 批准号: 07670255
• 负责人: 岡田 則子
• 金额: --
• 依托单位: Nagoya City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07670255/
• 关键词: 種特異的補体制御膜因子; 異種移植; トランスジェニック動物; 補体活性化; ラットCrry

1)種特異的補体制御膜因子が存在する自己細胞では補体反応が強力に抑制され、それらを持たない侵入異物にのみ補体は反応する仕組みになっている。異種細胞にはこれらの因子が存在しないので補体反応が起こり、異種移植などでは補体による急性拒否反応がおこる一因となる。そこで、これらの遺伝子をブタに導入したトランスジェニックブタの作成が試みられているが、ヒトへの異種移植用トランスジェニック動物の実用化に当たっては、動物実験による基礎研究の知見が必須である。2)そこで実験動物の種特異的補体制御膜因子のcDNAクローニングを行いラットの5I2抗原(Crry)を得たので、その遺伝子を導入発現させたトランスフェクタントを作成した。5I2抗原cDNAをpCDM8またはpBK-CMVベクター等を用いてトランスフェクション用のベクターを構築し、CHOやCOS細胞にエレクトロポーレーション法にてトランスフェクションした。トランスフェクタントでの5I2抗原cDNA転写発現量をノーザンブロッド法や半定量RT-PCR法で測定した。細胞膜上への蛋白発現量は5I2抗原に対するモノクローナル抗体5I2を用いて免疫蛍光染色し、フローサイトメトリーで定量した。発現させた5I2抗原がラット補体反応を抑制することを確かめた。3)ラット補体の反応を強力に抑制することを確認したトランスフェクト細胞をラット皮下、肝皮膜下、肝臓等に接種してそれらの消長を継続的に解析することにより、補体制御膜因子遺伝子導入による異種移植反応の抑制を実験動物で解析する。本研究は異種移植反応の制御に多くの情報をもたらすものである。

1) species specific repair system royal membrane factor exist が す る their cells で は complement the 応 が powerful に inhibit さ れ, そ れ ら を hold た な い invading foreign body に の み complement は anti 応 す る blackstone group み に な っ て い る. Heterogeneous cells に は こ れ ら の factors が し な い の で complement the 応 が up こ り, xenotransplantation な ど で は complement に よ る acute refusal against 応 が お こ る due to と な る. そ こ で, こ れ ら の posthumous son 伝 を ブ タ に import し た ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク ブ タ の done try が み ら れ て い る が, ヒ ト へ の xenotransplantation using ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ の ク animals be used the に when た っ て は, animal be 験 に よ る の know basic research must see が で あ る. 2) そ こ で be の 験 animal species specific repair system royal membrane factor の cDNA ク ロ ー ニ ン グ を line い ラ ッ ト の five i2 antigen (Crry) を た の で, そ の heritage 伝 son を import 発 now さ せ た ト ラ ン ス フ ェ ク タ ン ト を made し た. 5 i2 antigen cDNA を pCDM8 ま た は pBK - CMV ベ ク タ ー い を in て ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン with の ベ ク タ ー を constructing し, CHO や COS cell に エ レ ク ト ロ ポ ー レ ー シ ョ ン method に て ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン し た. ト ラ ン ス フ ェ ク タ ン ト で の 5 i2 antigen cDNA planning write 発 now quantity を ノ ー ザ ン ブ ロ ッ ド や semi-quantitative rt-pcr method determination of で し た. Protein membrane へ の 発 amount now は 5 i2 antigen に す seaborne る モ ノ ク ロ ー ナ ル antibody 5 i2 を with い て immune 蛍 light dyeing し, フ ロ ー サ イ ト メ ト リ ー で quantitative し た. The occurrence of させた5I2 antigen がラット complement anti応 を inhibition する めた とを confirmation めた めた. 3) ラ ッ ト complement の anti 応 を powerful に inhibit す る こ と を confirm し た ト ラ ン ス フ ェ ク ト cells を ラ ッ ト skin, liver, liver viscera under skin membrane に vaccination し て そ れ ら の changeing を 継 続 に resolution す る こ と に よ り, filling system royal membrane factor but 伝 import に よ る xenotransplantation anti 応 の inhibit を be 験 animal で parsing す る. In this study, <s:1> xenotransplantation is used to counteract 応 <s:1> control に multiple く <s:1> information を <s:1> たらす たらす である である である.

项目成果

Nishikawa, K.: "Local inflammation caused by a monoclonal antibody which blocks the function of the rat membrane inhibitor of C3 convertase." J. Immunol.156. 1182-1188 (1996)

Nishikawa, K.：“由单克隆抗体引起的局部炎症，该抗体可阻断 C3 转化酶的大鼠膜抑制剂的功能。”

Nomura,A.: "Tubulointerstitial injury induced in rats by a monoclonal antibody which inhibits function of a membrane inhibitor of complement." J.Clin.Inv.96. 2348-2356 (1995)

Nomura,A.：“单克隆抗体可抑制补体膜抑制剂的功能，从而诱导大鼠肾小管间质损伤。”

岡田則子: "バイオデイフェンスシリーズ1 ヒトと動植物のデイフェンス・・巧妙な異物との戦い" 菜根出版(印刷中), (1996)

冈田纪子：“生物防御系列 1：人类和动植物的防御……与巧妙的外来物质的战斗”Nane Publishing（目前正在印刷），（1996 年）

Okada,N.: "A monoclonal antibody which blocks the complement regulatory activity of guinea pig erythrocytes and characterization as guinea pig decay accelerating factor." J.Immunol.154. 6103-6111 (1995)

Okada,N.：“一种单克隆抗体，可阻断豚鼠红细胞的补体调节活性，并被描述为豚鼠腐烂加速因子。”

服部義郎: "最新内科学大系74 関節疾患" 中山書店, 368 (1995)

服部芳郎：《最新内科74种关节疾病》中山书店，368（1995）