神経細胞におけるGタンパク質βγサブユニット・MAPキナーゼ・遺伝子発現系

G蛋白βγ亚基、MAP激酶和神经细胞基因表达系统

基本信息

批准号：
08270214
负责人：
東原和成
金额：
$ 1.6万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08270214/
关键词：
嗅覚レセプター Gタンパク質匂い遺伝子発現制御

项目摘要

本研究では、神経細胞での遺伝子発現調節を理解するために嗅覚系をモデルシステムとして選び、化学信号を応答する感覚系の情報伝達機構を検索し、レセプターレベルの認識と脳神経系レベルでの認識との比較する。匂いの受容体はGタンパク共役型なので、嗅細胞内でMAPキナーゼを介した遺伝子発現経路が匂い刺激で活性化される事が予想される。つまり、嗅覚レセプターシグナル伝達におけるGタンパク質関連経路とMAPキナーゼ活性化による遺伝子発現制御のクロストークを解析する。本年度は、嗅覚応答情報伝達路を再構成するための第一歩として、今まで困難であった嗅覚レセプターの発現とリガンド・レセプターの対応付けに焦点を絞って進めた。ある匂いに対応するレセプターを単離するために、匂い刺激によるCa^<2+>上昇測定法と、応答した単一細胞からのRT-PCR法を確立した。同時に、既知の推定上の匂いレセプターをmammalian細胞で発現させる方法も確立した。これらの成果により、嗅覚レセプターと匂い物質との対応付けができつつある。さらに下流のシグナル伝達、特に本研究テーマの最終目的である、嗅覚レセプター・G蛋白質からの遺伝子発現制御系をモニターするために、現在、アデノウイルスベクターを構築中である。また、嗅覚レセプターとG蛋白質とのカップリングの再構成を試みており、G蛋白質αサブユニットあるいはβγサブユニットの関与を検索中である。これら匂い応答情報伝達路が再構成されれば、MAPキナーゼの関わりを阻害剤をもちいて検索する。

在这项研究中，我们选择嗅觉系统作为模型系统，以了解神经元中基因表达的调节，寻找对化学信号响应的感觉系统的信号传递机制，并将受体级别的识别与颅神经系统水平的识别进行比较。由于气味受体是G蛋白偶联类型，因此预计嗅觉细胞内的MAP激酶介导的基因表达途径将被气味刺激激活。换句话说，我们分析了嗅觉受体信号传导中G蛋白相关的途径与MAP激酶激活调节基因表达之间的串扰。今年，我们专注于配体受体表达与嗅觉受体的表达的关联，到目前为止一直很困难，这是重建嗅觉响应信息传输通道的第一步。为了隔离与某种气味相对应的受体，我们建立了一种用气味刺激和来自单个细胞的RT-PCR测量Ca^<2+>升高的方法。同时，已经建立了用于表达哺乳动物细胞中已知的气味受体的方法。这些结果导致嗅觉受体与气味物质的关联。此外，目前正在构建腺病毒载体，以监视下游信号传导，尤其是该研究主题的最终目标，即来自嗅觉受体G蛋白的基因表达控制系统。此外，我们试图重建嗅觉受体和G蛋白之间的耦合，并正在寻找G蛋白α或βγ亚基的参与。一旦重建了这些气味响应信息传输通道，就可以使用抑制剂搜索地图激酶的参与。