PHドメインを含むGタンパク質共役型受容体キナーゼの機能解析

含PH结构域的G蛋白偶联受体激酶的功能分析

• 批准号: 08670140
• 负责人: 東原 和成
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08670140/
• 关键词: 受容体キナーゼ; PHドメイン; リン脂質; Gタンパク質

本研究では、Gタンパク質共役型受容体キナーゼ(βARK)のPHドメインを介した膜移行の生理的意義を分子レベルで解析するため、PHドメイン内の部位特異的変異株を作り、PHドメインリガンドであるGBγとPIP2のβARK活性に対するin vivoでの必要性を調べた。すなわち、βARKはPHドメインを介してPIP2とGβγに結合することがin vitroの系では示されているが、これらの相互作用が生理的に意味があるかは不明である。そこで、上記のin vitroでのPHドメインの機能を失ったβARK変異体が、培養細胞内in vivoでも機能を失うかを検索した。すでに報告ずみのPHドメインのfusion蛋白質での解析結果をもとに、PHドメイン内のアミノ酸を部位特異的に変異させたβARKの発現ベクターを作製した。エピトープタグをつけたムスカリン受容体とアドレナリン受容体を用い、細胞を[^<32>P]リン酸とアゴニストの有無で保温し、受容体を可溶化後エピトープに対する抗体を用いて沈降させ受容体のリン酸化を調べた。Gβγへの結合に重要な部位を変異させたβARKは、アゴニスト依存性のレセプターのリン酸化能力を失ったが、PIP2の結合部位の変異はなんらin vivoでの影響を認められなかった。そこで、私は、PIP2以外のリン脂質の関わりを推定し、PS(phosphatidylserine)の効果をin vitroで調べたところ、Gβγの存在下でPSはβARKの膜移行を促進した。このことは、PIP2のPHドメインへの結合による膜移行は唯一の機構ではないことを示している。以上の結果より、PHドメインにGβγが結合することはβARKの活性化に不可欠で、PIP2やPSといったリン脂質が関わっていることが示唆された。

In this study, we studied the meaning of membrane migration physiology in co-operative receptacles (β ARK). The meaning of membrane migration physiology was analyzed by molecular analysis, the specific parts of PH cells were analyzed, and the GB γ PIP2 β ARK activity was detected by GB γ PIP2 β ARK activity and the necessity of membrane migration. The physiological implications of the interaction between β-ARK and β-ARK were not known by the introduction of PIP2-G β-γ and the combination of β-DNA and β-γ. The loss of the β-ARK receptor and the culture of the intracellular in vivo receptor in the in vitro, the PH and the cytosol were observed in this study. The results of the analysis of the results of the analysis of PH protein and fusion protein in the report show that the sour parts of the PH report are sour and sour. The β-ARK shows that there is a significant difference between the two parts. There is no thermal insulation in the cells [^ & lt;32>P]. After the capacitors can be dissolved, the antibodies can be acidified and acidified. G β γ-ray combined with the important parts, such as β-ARK, dependence, acidification, loss of acidification ability, and PIP2, the combination of in vivo, β-γ, β-γ, β-β- PS β ARK membrane migration promotion in the presence of PS β ARK in the presence of in vitro, privacy, PIP2, presumption, PS (ARK), and G β γ. The device, PIP2, PHE, and PIP2 were used in combination with the membrane transfer mechanism to show the accuracy. The above results show that the activity of β-ARK is not unavoidable in the combination of PH, G β, β-γ and PIP2. The results show that the activity of β-PIP2 is not unavoidable.