マウスの不揮発性フェロモン物質の構造決定と受容体の同定

小鼠非挥发性信息素物质的结构测定及受体鉴定

基本信息

批准号：
16688005
负责人：
東原和成
金额：
$ 13.06万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (A)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16688005/
关键词：
フェロモンマウス鋤鼻器官受容体遺伝子発現誘導構造決定

项目摘要

哺乳類のなかでもネズミやマウスなど齧歯類では、フェロモン物質が、性差や異種の識別、異性生殖機能の状態の識別、性周期・成熟度・性行動のタイミング、攻撃行動などを制御していることが知られている。前年度までに、外分泌腺由来のペプチドが鋤鼻器官を刺激することを見出した。本年度は、メスマウスをそれらのペプチドに曝すと、Gタンパク質Gαoとフェロモン受容体候補遺伝子V2Rを発現する基底層側の鋤鼻上皮の鋤鼻神経においてc-Fos発現誘導が見られることを見出した。また、嗅細胞と同様に、個々の鋤鼻神経には、約61種類あるV2Rのうちひとつだけが発現している。つまり、ペプチドがV2Rによって認識されているとすれば、c-Fos発現細胞には、ある特定のV2Rが発現していることが予想される。そこで、c-Fosの免疫染色とV2Rのin situ hybridizationとのダブル染色をすることにより、c-Fos発現細胞に発現しているV2Rの同定を試みた。まず、ゲノムデータベースから全長V2Rをコードしていると予測される44個のV2Rを抽出し、相同性にもとづいて、20個のPCRプライマーセットをデザインした。鋤鼻上皮由来のRNAサンプルを用いて、20ペアのRT-PCRを行ったところ、12ペアにおいて遺伝子の増幅がみられた。そこで、この12個のV2RタイプのcRNAをプローブとして用いて、c-Fosとの二重染色を行ったところ、一種類のV2R(V2Rpと命名)と完全に重なった。V2Rpプローブは、ゲノム上の相同性の高い6種類のV2Rを認識していると考えられるため、それぞれを特異的に区別するプローブを再設計し、二重染色を行ったところ、ひとつのV2R(V2Rp5と命名)と完全に重なった。すなわち、ペプチドによって刺激されてc-Fosの発現誘導が引き起こされる鋤鼻神経には、V2Rp5のみが発現していることから、V2Rp5が標的の受容体と考えられる。次に、V2Rp5の全長cDNAの決定を行ったところ、6個のexonと5個のintronからなる全長約17kbであることがわかり、さらに、alternative splicingがおきて5種類のmRNAができていることがわかった。

在哺乳动物中，在小鼠和小鼠等啮齿动物中，众所周知，信息素物质控制着不同物种之间的性别差异和区别，异性恋生殖状态，性周期，成熟，性行为的时间，性行为的时间和积极行为。到上一年，还发现外分泌腺来源的肽刺激了vonasal器官。今年，我们发现，当雌性小鼠暴露于这些肽时，在基础层侧面的vonasal上皮的沃纳西神经中观察到C-FOS表达诱导，这表达G蛋白GαO和信息素受体候选者候选者基因V2R。同样，就像嗅觉细胞一样，在每个单独的vonanosal神经中只表达大约61种V2R类型的V2R中的一种。换句话说，如果通过V2R识别肽，则可以预期在表达C-Fos的细胞中表达特定的V2R。因此，我们试图通过用C-FOS免疫染色和V2R的原位杂交在C-FOS表达细胞中表达的V2R。首先，从基因组数据库中提取了44个V2R，并根据同源性设计了20个PCR引物集。使用源自Vo-Nasal上皮的RNA样品以20对进行RT-PCR，并在12对中观察到基因扩增。因此，将这12个V2R型CRNA用作用C-Fos对染色进行双染色的探针，并且混合物与一种V2R（称为V2RP）完全重叠。由于V2RP探针被认为可以识别具有高基因组同源性的六种类型的V2R，因此我们重新设计了一个专门区分了它们并进行双重染色的探针，并且与一个V2R完全重叠（命名为V2RP5）。也就是说，V2RP5仅在vonasal神经中表达，该神经被肽刺激以诱导C-FOS表达，因此V2RP5被认为是靶受体。接下来，当确定V2RP5的全长cDNA时，发现总长度约为17 kb，由六个外显子和五个内含子组成，并且还发现进行了替代剪接以形成五种类型的mRNA。