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マウスの不揮発性フェロモン物質の構造決定と受容体の同定

小鼠非挥发性信息素物质的结构测定及受体鉴定

基本信息

批准号：
16688005
负责人：
東原和成
金额：
$ 13.06万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (A)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16688005/
关键词：
フェロモンマウス鋤鼻器官受容体遺伝子発現誘導構造決定

项目摘要

哺乳類のなかでもネズミやマウスなど齧歯類では、フェロモン物質が、性差や異種の識別、異性生殖機能の状態の識別、性周期・成熟度・性行動のタイミング、攻撃行動などを制御していることが知られている。前年度までに、外分泌腺由来のペプチドが鋤鼻器官を刺激することを見出した。本年度は、メスマウスをそれらのペプチドに曝すと、Gタンパク質Gαoとフェロモン受容体候補遺伝子V2Rを発現する基底層側の鋤鼻上皮の鋤鼻神経においてc-Fos発現誘導が見られることを見出した。また、嗅細胞と同様に、個々の鋤鼻神経には、約61種類あるV2Rのうちひとつだけが発現している。つまり、ペプチドがV2Rによって認識されているとすれば、c-Fos発現細胞には、ある特定のV2Rが発現していることが予想される。そこで、c-Fosの免疫染色とV2Rのin situ hybridizationとのダブル染色をすることにより、c-Fos発現細胞に発現しているV2Rの同定を試みた。まず、ゲノムデータベースから全長V2Rをコードしていると予測される44個のV2Rを抽出し、相同性にもとづいて、20個のPCRプライマーセットをデザインした。鋤鼻上皮由来のRNAサンプルを用いて、20ペアのRT-PCRを行ったところ、12ペアにおいて遺伝子の増幅がみられた。そこで、この12個のV2RタイプのcRNAをプローブとして用いて、c-Fosとの二重染色を行ったところ、一種類のV2R(V2Rpと命名)と完全に重なった。V2Rpプローブは、ゲノム上の相同性の高い6種類のV2Rを認識していると考えられるため、それぞれを特異的に区別するプローブを再設計し、二重染色を行ったところ、ひとつのV2R(V2Rp5と命名)と完全に重なった。すなわち、ペプチドによって刺激されてc-Fosの発現誘導が引き起こされる鋤鼻神経には、V2Rp5のみが発現していることから、V2Rp5が標的の受容体と考えられる。次に、V2Rp5の全長cDNAの決定を行ったところ、6個のexonと5個のintronからなる全長約17kbであることがわかり、さらに、alternative splicingがおきて5種類のmRNAができていることがわかった。

Mammalian のなかでもネズミやマウスなど gnat type では, フェロモンsubstance が, sexual difference やdifferent species のidentification, heterosexual reproductive function Identification of status, sexual cycle, maturity, and sexual action, attack action, control, control, and control. The previous year's までに, the origin of the exocrine glands のペプチドがhoe nose organ をstimulation することを见出した. This year's は、メスマウスをそれらのペプチドに出すと、GタンパクqualityGαoとフェロモンReceiver Candidate 伝子V2Rを発appearsするbasal layer sideのhoenasal epitheliumのhoe nose神経においてc-Fos発appears to induceが见られることを见出した.また, olfactory cell と同様に, individual 々のhoe nose god 経には, about 61 types of あるV2R のうちひとつだけが発 appear している.つまり、ペプチドがV2Rによって见されているとすれば、c-Fo s発 appear cells には, あるspecific のV2R が発appears していることが yu think される.そこで、c-Fosのimmunostaining and V2Rのin situ Hybridization and staining were carried out, and c-Fos cells were stained and V2R was tested. full length V2 R を extracted し, identity にもとづいて, 20 のPCR プライマーセットをデザインした. The nasal epithelial origin of the RNA is used, the 20 RT-PCR line is used, and the 12 tube is used to increase the width of the nose.そこで、この12のV2RタイプのcRNAをプローブとして用いて、c-Fos It is a kind of のV2R (named after V2Rpと), which is a kind of double coloring を行ったところ. V2Rpプローブは、ゲノム上の高い6 speciesのV2Rをknowledgeしているとtestえられるため、それぞれをSpecialにるプローブをredesignし, double dyeing を行ったところ, ひとつのV2R (V2Rp5とname) and completely に重なった.すなわち、ペプチドによってstimulating されてc-Fosの発在inducing がinducing き出こされるhoe nose神経には, V2Rp5's のみが発appears していることから, V2Rp5's standard のacceptor と考えられる. Secondary, V2Rp5 full-length cDNA の行ったところ, 6 のexon と5 のintron からなるFull length is about 17kb であることがわかり, さらに, alternative splicingがおきて5 kindsのmRNAができていることがわかった.