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マウスの不揮発性フェロモン物質の構造決定と受容体の同定

小鼠非挥发性信息素物质的结构测定及受体鉴定

基本信息

批准号：
16688005
负责人：
東原和成
金额：
$ 13.06万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (A)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16688005/
关键词：
フェロモンマウス鋤鼻器官受容体遺伝子発現誘導構造決定

项目摘要

哺乳類のなかでもネズミやマウスなど齧歯類では、フェロモン物質が、性差や異種の識別、異性生殖機能の状態の識別、性周期・成熟度・性行動のタイミング、攻撃行動などを制御していることが知られている。前年度までに、外分泌腺由来のペプチドが鋤鼻器官を刺激することを見出した。本年度は、メスマウスをそれらのペプチドに曝すと、Gタンパク質Gαoとフェロモン受容体候補遺伝子V2Rを発現する基底層側の鋤鼻上皮の鋤鼻神経においてc-Fos発現誘導が見られることを見出した。また、嗅細胞と同様に、個々の鋤鼻神経には、約61種類あるV2Rのうちひとつだけが発現している。つまり、ペプチドがV2Rによって認識されているとすれば、c-Fos発現細胞には、ある特定のV2Rが発現していることが予想される。そこで、c-Fosの免疫染色とV2Rのin situ hybridizationとのダブル染色をすることにより、c-Fos発現細胞に発現しているV2Rの同定を試みた。まず、ゲノムデータベースから全長V2Rをコードしていると予測される44個のV2Rを抽出し、相同性にもとづいて、20個のPCRプライマーセットをデザインした。鋤鼻上皮由来のRNAサンプルを用いて、20ペアのRT-PCRを行ったところ、12ペアにおいて遺伝子の増幅がみられた。そこで、この12個のV2RタイプのcRNAをプローブとして用いて、c-Fosとの二重染色を行ったところ、一種類のV2R(V2Rpと命名)と完全に重なった。V2Rpプローブは、ゲノム上の相同性の高い6種類のV2Rを認識していると考えられるため、それぞれを特異的に区別するプローブを再設計し、二重染色を行ったところ、ひとつのV2R(V2Rp5と命名)と完全に重なった。すなわち、ペプチドによって刺激されてc-Fosの発現誘導が引き起こされる鋤鼻神経には、V2Rp5のみが発現していることから、V2Rp5が標的の受容体と考えられる。次に、V2Rp5の全長cDNAの決定を行ったところ、6個のexonと5個のintronからなる全長約17kbであることがわかり、さらに、alternative splicingがおきて5種類のmRNAができていることがわかった。

Mammals have different sex characteristics, such as sex difference, heterosexual reproductive status, sexual cycle, maturity, sexual behavior, aggressive behavior, and control. In the past year, the origin of exocrine glands was found in the nasal organs. This year, the expression of c-Fos in the nasal epithelium on the basal layer side of the receptor candidate V2R was detected. About 61 species of V2R were found in the nasal neurons. For example, if a V2R is detected in a cell, a specific V2R is detected in a cell. Immunostaining of c-Fos and in situ hybridization of V2R were performed in the presence of c-Fos and in the presence of V2R. 44 V2Rs were extracted, 20 PCR were extracted, and 20 PCR were extracted. The RNA gene of the nasal epithelium was detected by RT-PCR in 20 samples, and the RNA gene was detected in 12 samples. The 12 V2R cRNAs were identified by double staining, and one V2R (V2Rp designation) was identified by double staining. V2Rp is the same as V2 Rp, and V2 Rp is the same as V2 Rp. V2 Rp is the same as V2 Rp, and V2 Rp is the same as V2 Rp. The expression of c-Fos is induced by the stimulation of the receptor and the receptor of V2 Rp5. The full-length cDNA of V2Rp5 is about 17kb in length, 6 exons, 5 introns, alternative splicing, and 5 types of mRNA.