RNA結合蛋白質hnRNP Dの配列特異的一本鎖核酸認識機構の解明

阐明RNA结合蛋白hnRNP D的序列特异性单链核酸识别机制

• 批准号: 08260102
• 负责人: 石川 冬木
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08260102/
• 关键词: hnRNP D; RNA結合蛋白質; NMR; RNPモチーフ

(1)D1H蛋白質単独の立体構造決定安定同位体15N標識化及び13C,15N二重標識化したD1Hを作製し、各種の二重、三重共鳴NMR法による解析を行い、主鎖の帰属を完了した。その結果、D1Hが有するRNPモチーフもこのモチーフを有する他の蛋白質と同様に、βαβ-βαβ構造をとっていることを明らかにした。さらにD1Hでは、alternmative splicing部位よりN末端側にもβストランド様構造がひとつ存在することを明らかにした。さらに三次元立体構造を明らかにするための側鎖の帰属もほぼ完了した。また、構造計算を既に開始しており、目下、主鎖のr.m.s.d.が1.5オングストロームの構造を得ている。(2)D1H蛋白質と基質RNAとの複合体の構造解析これまでに、15N標識化D1Hと結合するRNAオリゴヌクレオチド、(UUAGGG)4、の滴定を1H-15NHSQCによりモニターし、複合体形成の様子を調べた。そして、D1H:RNA=1:1のときのケミカルシフトパーターベションから、RNAと相互作用しているD1Hの残基の特定を行った。その結果相互作用は、RNPモチーフを有する他の蛋白質と同様、主にβシートのところでなされていることを明らかにした。さらに、D1Hではそれ以外に一番目のβシートとαヘリックスの間のループに位置する残基でもなされていることを明らかにした。さらに、(UUAGGG)の2回及び1回繰り返しの2種類のRNAについても同様な実験を行った。その結果、6merのRNAでも24merの時と同様な特異的な相互作用が生じる事を明らかにした。

(1) the D1H protein 単 alone の three-dimensional structure decided to settle with the body of the 15 n logo and び 13 c, 15 n double identity change し た D1H を し, various の double and triple resonance NMR method に よ る parsing を い, main lock の 帰 is finished を し た. そ の results, D1H が have す る RNP モ チ ー フ も こ の モ チ ー フ を have す る he の protein と with others に, beta alpha beta beta alpha beta structure を と っ て い る こ と を Ming ら か に し た. さ ら に D1H で は, alternmative splicing site よ り N terminal side に も beta ス ト ラ ン ド others in tectonic が ひ と つ exist す る こ と を Ming ら か に し た. Youdaoplaceholder0 three-dimensional structure を Ming らに するため にするため <s:1> side lock 帰 帰 genus ほぼ ほぼ completed た た. ま た, structure calculation を having begun に し て お り, now, the main lock の R.M.S.D. が 1.5 オ ン グ ス ト ロ ー ム の tectonic を have て い る. (2) the D1H と protein matrix RNA と の complex の structure こ れ ま で に, 15 n D1H と combining す る RNA オ リ ゴ ヌ ク レ オ チ ド, (UUAGGG) 4, 1 h - 15 の titration を NHSQC に よ り モ ニ タ ー し, complex formation の others child を adjustable べ た. そ し て, D1H: RNA = 1:1 の と き の ケ ミ カ ル シ フ ト パ ー タ ー ベ シ ョ ン か ら interaction, RNA と し て い る D1H の residues の specific line を っ た. そ の results は interaction, RNP モ チ ー フ を have す る he の protein と with others, Lord に beta シ ー ト の と こ ろ で な さ れ て い る こ と を Ming ら か に し た. さ ら に, D1H で は そ れ に outside a mesh の beta シ ー ト と alpha ヘ リ ッ ク ス の between の ル ー プ に position す る residues で も な さ れ て い る こ と を Ming ら か に し た. Youdaoplaceholder0, (UUAGGG) <s:1> 2 and び1 are used to return the <s:1> to return the two types of <s:1> RNAに った て て び な similar な experiment を った. そ の results, 6 killing の RNA で も 24 killing の と with others when な specific な interaction が raw じ る matter を Ming ら か に し た.

项目成果

Sakamoto,T.: "Properties of a hammerhead ribozyme with deletion of the stem II." J.Biochem. (in press). (1996)

Sakamoto,T.：“删除茎 II 的锤头核酶的特性。”

Kurihara,Y.: "Structural properties and RNA-binding activities of two RNA-Recognition Motifs of a nueral RNA binding protein, mouse-Musashi-1." Gene. (in press). (1996)

Kurihara,Y.：“神经 RNA 结合蛋白 mouse-Musashi-1 的两个 RNA 识别基序的结构特性和 RNA 结合活性。”

Ishikawa,F.: "A review article:Telomere crisis,the driving force in cancer cell evolution." Biochem.Biophys.Res.Commun.230. 1-6 (1997)

Ishikawa,F.：“一篇评论文章：端粒危机，癌细胞进化的驱动力。”

Nakayama,J.: "TLP1:A gene encoding a protein component of mammalian telomerase is a novel member of WD-repeats family." Cell. (in press). (1977)

Nakayama, J.：“TLP1：编码哺乳动物端粒酶蛋白质成分的基因是 WD 重复序列家族的新成员。”

Tatematsu,K.: "A novel quantitative“stretch PCR assay",that detects a dramatic increase in telomerase activity during the progression of myeloid leukemias." Oncogene. 13. 2265-2274 (1996)

Tatematsu, K.：“一种新颖的定量“延伸 PCR 测定”，可检测骨髓性白血病进展过程中端粒酶活性的显着增加。”Oncogene。