神経可塑性に関与するニューロトロフィン遺伝子のホスホリパーゼA2による制御

磷脂酶 A2 对参与神经可塑性的神经营养素基因的调节

基本信息

批准号：
08270229
负责人：
中村彰治
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Yamaguchi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

私たちは、抗うつ薬による神経線維の再生の分子機構にフォスフォリパーゼA2(PLA2)系が関与している可能性を示唆した。このような研究結果から、神経線維の発芽・再生を誘発すると考えられるニューロトロフィン遺伝子の発現機序にPLA2系が関与している可能性を推測し、現在実験を行っている。今回は、まずニューロトロフィン遺伝子の発現を検討する前に、・brain-derived neurotrophic factor(BDNF)の発現に対すPLA2の効果をBDNFの抗体を用いて免疫組織化学的に検討した。生後1日目のラットの大脳皮質を用いて通常の方法でprimary cultureを作製した。PLA2のinhibitorであるmepacrineを10^<-4>Mから10^<-14>Mまでの濃度で加えた実験群と対照群において、培養細胞の生存・分化とBDNFの発現について比較した。Mepacrine10^<-4>〜10^<-6>Mでは、培養細胞は生存できなかった。10^<-8>Mから10^<-10>Mでは、mepacrineは濃度依存性に培養細胞の突起の伸展を抑制した。一方、BDNFの発現は、mepacrine10^<-8>〜10^<-10>Mで濃度依存性に抑制された。この実験結果から、ニューロトロフィンの発現にPLA2系が関与している可能性が強く示唆されたので、現在以下の点についin situ hybridizationとNorthern blotを用いて検討中である。1)培養細胞とin vivoの系において、BDNFとneurotrophin3(NT-3)の遺伝子発現が、PLA2のinhibitorで阻害されるか。2)これらニューロトロフィンmRNAの発現に関与しているのは、アラキドン酸カスケードのどの系か。3)melittinによってBDNFとNT-3のmRNAの発現が促進されるか。

我们建议磷脂酶A2（PLA2）系统可能参与抗抑郁药诱导的神经纤维再生的分子机制。基于这些研究结果，我们推测PLA2系统可能与神经营养蛋白基因表达的机理有关，这些机制被认为会诱导神经纤维的发芽和再生，并且目前正在进行实验。在本文中，在首次检查神经营养基因的表达之前，使用BDNF抗体研究了PLA2对脑衍生的神经营养因子（BDNF）的影响。使用正常方法在出生的第一天，使用大鼠的大鼠大脑皮质制备一级培养。在实验组和对照组之间比较了培养细胞的存活和分化和BDNF的表达，其中巨氨酸的息肉抑制剂以10^<-4> m至10^<-14> m的浓度添加了PLA2的抑制剂。培养的细胞无法在巨烷10^<-4> -10^<-6> m上生存。从10^<-8> m到10^<-10> m，巨氨酸以浓度依赖性方式抑制培养细胞中突起的扩散。另一方面，在mepacrine10^<-8> -10^<-10> m之间以浓度依赖的方式抑制BDNF的表达。该实验的结果强烈表明PLA2系统可能参与神经营养蛋白的表达，并且目前正在使用原位杂交和北印迹研究以下几点。 1）BDNF和Neurotrophin3（NT-3）抑制剂的基因表达是否是培养细胞和体内系统中的基因表达？ 2）这些神经营养蛋白mRNA的表达涉及哪种花生四烯酸级联反应？ 3）蜂毒素会促进BDNF和NT-3 mRNA的表达吗？