核孔を介したmRNA核外輸送に関与するRNA結合蛋白の解析

参与 mRNA 通过核孔核输出的 RNA 结合蛋白分析

• 批准号: 08274215
• 负责人: 遠藤 仁司
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08274215/
• 关键词: RNA結合蛋白; 核孔蛋白; 選択的スプライシング; スプライシング因子

我々はこれまで、ATP合成酵素γサブユニット遺伝子が筋特異的にエクソンを除外するカセット型の選択的RNAスプライシングをうけて、アイソフォームを形成することを示した。我々は、この選択的スプライシングの調節を司る因子を明らかにするために、degenerate primerを用いたポリメラーゼ連鎖反応による、新規な筋特異的なRNA結合蛋白のクローニングを目的とした。RRM(RNA recognition motif)型RNA結合ドメインの保存配列から作成したdegenerate primerを用いて、筋特異的なスプライシングを誘導する前後の細胞からRNAを抽出し、デファレンシャルディスプレイ変法を用いて誘導後に特異的に発現する新規なRRM型RNA結合蛋白のcDNA断片を得た。この遺伝子断片をプローブとして、ヒト骨格筋cDNAライブラリーを用いて、プラークハイブリダイゼーション法にてcDNAのクローン化を試みた。その結果、少なくとも2種類のcDNAを得た。いずれもcDNA前半はポリA結合蛋白質と非常によく似ており、そのRNA結合部位に関してはアミノ酸レベルで94%の一致、98%のホモロジーが存在した。一方のcDNAは全長がポリA結合蛋白と似ていた。このcDNAは、筋組織で優位に発現していた。もう一方のcDNAは、後半がRan結合ドメインをコードしていた。RACE法にて全長cDNAをクローン化したところ、4個のRan結合ドメインと12個のXFXFGモチーフを有しており、核孔に存在する蛋白と考えられた。この後半部分の遺伝子はすでに報告されてるRanBP2/Nup358と一致していた。RNA結合ドメインとRan結合ドメインの間の遺伝子断片を用いてRNAブロット法にて発現量を検討したところ、約10kbのRanBP2の遺伝子の下方、約8kbの位置に発現量の少ないバンドが認められた。その構造から、このcDNAは核孔を介したRNA核外輸送に関与するのではないかと考えられた。このように、RNA結合領域とRan結合領域、およびXFXFGモチーフを持つ遺伝子は、酵母においても報告がないため、慎重にこの遺伝子の存在を検討中である。

I 々 は こ れ ま で, ATP synthesis enzyme gamma サ ブ ユ ニ ッ ト posthumous son 伝 が muscle specific に エ ク ソ ン except を す る カ セ ッ ト type の sentaku RNA ス プ ラ イ シ ン グ を う け て, ア イ ソ フ ォ ー ム を form す る こ と を shown し た. I 々 は, こ の sentaku of ス プ ラ イ シ ン グ の adjust を を Ming si る factor ら か に す る た め に, degenerate primer を with い た ポ リ メ ラ ー ゼ chain against 応 に よ る, new rules な muscle specific な rna-binding protein の ク ロ ー ニ ン グ を purpose と し た. RRM(RNA recognition motif) type RNA binds to ドメ and <s:1> populations for preservation and coordination of ら to form <s:1> たdegenerate Primer を with い て, specific な ス プ ラ イ シ ン グ を induced す る の cells before and after か ら RNA を spare し, デ フ ァ レ ン シ ャ ル デ ィ ス プ レ イ を - method using い て に specific after induction of に 発 now す る new rules な type RRM RNA binding protein の cDNA fragment を た. こ の posthumous son 伝 fragment を プ ロ ー ブ と し て, ヒ ト skeletal muscle cDNA ラ イ ブ ラ リ ー を with い て, プ ラ ー ク ハ イ ブ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン method に て cDNA の ク ロ ー ン change を try み た. Youdaoplaceholder0 そ results, less なくと なくと 2 types of <s:1> cDNAを obtained た. い ず れ も cDNA first half は ポ リ A binding protein と very に よ く like て お り, そ の rna-binding part に masato し て は ア ミ ノ acid レ ベ ル で の is consistent, 94% and 98% の ホ モ ロ ジ ー が exist し た. The cDNA <s:1> full length がポリA binding protein と is similar to て て た た. The <s:1> cDNA に and the で superior site に of the tendon tissue show <s:1> て た た た. One side of う う napped cDNA て, and the latter half がRan bound to ドメ ドメ をコ をコ ド ド て て た た. RACE method に て full-length cDNA を ク ロ ー ン change し た と こ ろ, 4 の Ran combining ド メ イ ン と 12 の XFXFG モ チ ー フ を have し て お り, nuclear pore に exist す る protein と exam え ら れ た. The second half of the <s:1> <s:1> cultural heritage 伝 offspring すでに report されてるRanBP2/Nup358と is consistent with て て た た た. Rna-binding ド メ イ ン と Ran combining ド メ イ ン の の between heritage 伝 son を fragment with い て RNA ブ ロ ッ ト method に て を 発 now quantity beg し 検 た と こ ろ, about 10 KB の RanBP2 の heritage 伝 の below, about 8 KB の position に 発 now fewer の な い バ ン ド が recognize め ら れ た. そ の tectonic か ら, こ の cDNA は を nuclear pore medium し た RNA nucleus delivery に masato and す る の で は な い か と exam え ら れ た. こ の よ う に, RNA combined with field と Ran combined with field, お よ び XFXFG モ チ ー フ を hold つ heritage 伝 は, yeast に お い て も report が な い た め, careful に こ の posthumous son 伝 の is を 検 beg in で あ る.

项目成果

Kagawa,Y.Endo,H.: "Genes for human ATP synthase : Its physiology and Aging." Biosci.Report. in press. (1997)

Kakawa,Y.Endo,H.：“人类 ATP 合酶基因：其生理学和衰老”。

Endo,H.: "A candidate gene for RNA export carrier protein has two RBDs (RNA birding domain and Ran binding domain)." Nucleic Acid Symp.Series. 33. 30-32 (1995)

Endo,H.：“RNA 输出载体蛋白的候选基因有两个 RBD（RNA 观鸟结构域和 Ran 结合结构域）。”

遠藤仁司: "筋特異的選択的RNAスプライシングの調節機構" 最新医学. 51. 1689-1696 (1996)

Hitoshi Endo：“肌肉特异性选择性 RNA 剪接的调节机制”现代医学 51. 1689-1696 (1996)。