筋分化システムに働くスプライシング因子の同定とその調節メカニズムの研究

作用于肌肉分化系统的剪接因子的鉴定及其调控机制研究

• 批准号: 14035245
• 负责人: 遠藤 仁司
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14035245/
• 关键词: 筋分化; ATP合成酵素; RNAスプライシング; 選択的スプライシング; ミトコンドリア; スプライシングサイレンサー; スプライシング因子; スプライシング調節

筋分化などの臓器の最終分化過程における劇的な細胞構造の変換には、一般に多数の分子種を効率的に変換する制御機構が必要である。本研究の目的は、筋分化システムにおける選択的スプライシングを調節する具体的なスプライシング調節因子を単離しその機能を解析することである。我々はこれまで、ATP合成酵素γサブユニット遺伝子の筋特異的な選択的スプライシングを再現するin vitro系を構築し、筋特異的なエキソン除外に働くシス配列(muscle-specific exonic splicing silencer)を同定した。本年度は、ATP合成酵素γサブユニットmRNA前駆体を基質としてin vitro splicing系やシスエレメント(MS-ESS)をプローブとしたノースウエスタン法、アフィニティカラム法などを用いて、HeLa細胞核抽出液から構成的スプライシング因子を、また筋特異的スプライシング誘導を示す酸性刺激後のHT1080細胞核抽出液から選択的スプライシング因子を精製した。さらに、これらのサンプルを二次元電気泳動法や質量分析法(TOF-MS Finger Print法)によりタンパク質の一次配列を決定し、スプライシング調節の候補トランス因子を複数同定した。それらはいずれもRNA結合モチーフを持ち、RNA結合蛋白質と予測される。現在、これらのcDNAのクローン化を試みており、これらのスプライシング調節活性をin vivo splicing系にて検定する予定である。一部cDNAの結果では、シスエレメント依存的に働く因子群と、非依存的に働く因子群とに分類できている。今後、得られたタンパク質を網羅的に解析し、筋特異的なスプライシング制御の全体像の検討を試みる予定である。

In the final differentiation process of tendon differentiation, the control mechanism is necessary for the transformation of cell structure and the transformation of molecular species in general. The purpose of this study is to analyze the function of the specific factors regulating the selection of the muscle differentiation system. In addition to muscle-specific splicing silencers, ATP synthase γ-enzymes and muscle-specific splicing silencers are also identified in vitro system construction. This year, ATP synthase γ-mRNA precursor matrix and in vitro splicing system (MS-ESS) were used in the preparation of HeLa cell nuclear extracts. After acid stimulation, HT1080 cell nuclear extract was purified from the selected protein. In this paper, two dimensional electrokinetic method and mass analysis method (TOF-MS Finger Print method) are used to determine the first order of quality and the candidate factors of adjustment. RNA binding protein prediction Now, this cDNA sequence has been tested to determine the regulatory activity in vivo splicing systems. A part of cDNA results in the following: dependent factors, independent factors In the future, we will get the analysis of the quality of the network, and the specific analysis of the quality of the network.

项目成果

Satoh, M.: "Differential sublocalization of the Dynamin-related protein OPA1 isoforms in mitochondria"Biochem.Biophys.Res.Commun.. 300. 482-493 (2003)

Satoh, M.：“线粒体中 Dynamin 相关蛋白 OPA1 亚型的差异亚定位”Biochem.Biophys.Res.Commun.. 300. 482-493 (2003)

Fukukawa, Y.: "Apaf-1 is a mediator of E2F-1-induced Apoptosis"J.Biol.Chem.. 277. 39760-39768 (2002)

Fukukawa, Y.：“Apaf-1 是 E2F-1 诱导的细胞凋亡的介质”J.Biol.Chem.. 277. 39760-39768 (2002)

Kirito, K: "TPO regulates Bcl-xL gene expression through Stat5 and phosphatidylinositol-3-kinase activation pathways"J Biol Chem. 277. 8329-8337 (2002)

Kirito, K：“TPO 通过 Stat5 和磷脂酰肌醇 3 激酶激活途径调节 Bcl-xL 基因表达”J Biol Chem。

Hayakawa, M.: "Muscle-specific exonic splicing silencer for exon exclusion in human ATP synthase γ-subunit pre-mRNA"J.Biol.Chem.. 277. 6974-6984 (2002)

Hayakawa, M.：“用于人 ATP 合酶 γ 亚基前 mRNA 中外显子排除的肌肉特异性外显子剪接沉默子”J.Biol.Chem.. 277. 6974-6984 (2002)

Tamada, H.: "cDNA cloning and characterization of Drb1, a new member of RRM-type neural RNA-binding protein"Biochem.Biophys.Res.Commun.. 297. 96-104 (2002)

Tamada, H.：“RRM 型神经 RNA 结合蛋白新成员 Drb1 的 cDNA 克隆和表征”Biochem.Biophys.Res.Commun. 297. 96-104 (2002)