新たな方法によるヒトRNA結合蛋白のcDNAクローニングの研究

新方法研究人类RNA结合蛋白的cDNA克隆

• 批准号: 07770089
• 负责人: 遠藤 仁司
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770089/
• 关键词: cDNAクローニング; 選択的スプライシング

申請者はヒト培養細胞においてATP合成酵素γサブユニットの筋組織特異的選択的スプライシングが可逆的に誘導される系を確立し、この筋特異的なエクソン選択には細胞内因子の蛋白合成が必須であることを示した(J. Biol.Chem.269, 12488-12493, 1994)。そのスプライシング調整因子としてRNA結合蛋白が可能性として考えやすい。申請者は選択的スプライシングの誘導前後で遺伝子発現量の変化するRNA結合蛋白遺伝子群のcDNAクローニングを目的とした。申請者は、まずスプライシング誘導前後の細胞からmRNAを精製し、cDNAを作成した。つぎにショウジョウバエからヒトまでのRNA結合蛋白のRNA結合保存領域に対応するdegenerate primerを用いて、PCRを行いdifferential displayにて誘導後に特異的に存在するRNA結合蛋白cDNA断片をクローン化した。この方法は通常のdifferential displayと異なり、特定のdegenerate primerを用いることにより、より特異的な発現を有する遺伝子群のcDNAクローニングを行なうことが可能である。誘導後に特異的に生じるPCR産物の塩基配列を決定し、アミノ酸の一次配列をコンピュータを用いてデータベースと比較した結果、未知のRNA結合蛋白のであった。RNAブロット法による遺伝子発現量の変化を誘導の前後で検討した結果、得られた遺伝子は誘導後にのみ発現していた。さらに各臓器では、心臓・骨格筋に臓器特異的に発現していた。現在、完全長cDNAをクローニング中である。RNA結合蛋白

Applicants need to select ATP biosynthesis enzyme γ-phenotype biosynthesis enzyme. The selection of reversing biosynthesis enzymes for intracellular factor protein synthesis must be confirmed (J. Biol.Chem.269, 12488-12493, 1994). The whole factor, the possibility of RNA binding protein, the possibility of binding protein, the whole factor, and the possibility of binding protein were studied in this paper. The subgroup of RNA-binding proteins selected by the applicant has been selected by the applicant before and after the determination of the target protein subgroup, cDNA protein subgroup, and the target target. The applicant, the applicant, the applicant and the cDNA. In this study, the RNA-binding protein RNA was used to preserve the field-specific RNA-binding protein cDNA fragments, and the differential display-binding protein cDNA fragments were used in the field of preservation. The RNA-binding protein cDNA fragments were used in the field of storage, and the cDNA fragments were used in the field of preservation. CDNA fragments were specifically expressed in the field. The differential display method is usually known as a differential display method, a specific degenerate primer is used as a tool, and a special method is used to show that there is a problem in the subgroup "cDNA". After that, the raw material of the PCR was arranged on the basis of the determination, and the RNA binding protein was used to compare the results, and the RNA binding protein was not known. The RNA method is used to determine the results before and after the guidance, and the results show that the results are correct. You can see the difference between the devices and the bones and tendons of the heart. At present, the full length of cDNA is in the middle of the war. RNA binding protein

项目成果

遠藤仁司: "Exclustion of an alternatively spliced exon in mitochondrial ATP synthase γ-subunit pre-mRNA requires de novo protein synthesis." J. Biol. Chem.269. 12488-12493 (1994)

Hitoshi Endo：“线粒体 ATP 合酶 γ 亚基前体 mRNA 中选择性剪接的外显子的排除需要从头合成蛋白质。”J. Biol. 12488-12493 (1994)。