Xenopus卵を用いたDNA複製開始機構の研究

利用非洲爪蟾卵研究DNA复制启动机制

• 批准号: 08277204
• 负责人: 室伏 擴
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08277204/
• 关键词: Xenopus卵; DNA複製; DNA複製開始因子; DNA untwisting因子; DNAヘリカーゼ

DNA Untwisting/Unwinding Factor(DUF)は、二重鎖DNAに負のひねりを加え、かつ二重鎖を巻き戻すことによって、in vitroでDNA複製を開始させる因子として、筆者らによってXenopus卵抽出液から単離された。この因子は、140kDaと96kDaの2種のサブユニット1:1から成る。これまでの研究で、96kDaサブユニット(DUF96)の全アミノ酸配列を決定し、これがマウスT160(V(D)J組換えのシグナル配列に結合する因子)およびヒトSSRP1(抗癌剤シスプラチン付加によって修飾されたDNAに結合する因子)と高い類似性を有することを明らかにした。本研究では、140kDaサブユニット(DUF140)の全アミノ酸配列を決定した。さらに、DUF140に対する抗体を作成し、DNA複製に対する効果を見た。(1)DUF140は出芽酵母のCDC68と約30%の類似性を持ち、N-末端近くには、DNAヘリカーゼモチーフと似た配列が、C-末端付近には酸性アミノ酸に富む部分と核移行シグナルと考えられる塩基性アミノの連続配列が存在することが分かった。(2)E.coli内で発現させたDUF140の部分フラグメントを抗原として、抗-DUF140抗体を作成した。この抗体を用いてXenopus卵無細胞抽出液からDUFを除くと、抽出液のDNA複製活性が顕著に減少することが分かった。また、この抗体を用いてXenopus培養細胞A6を染色すると、低密度で増殖中の細胞は、核が強く染色されたが、高密度の細胞では核の染色が減少することが分かった。このことは、DUF量が細胞増殖能と密接に関連することを示唆する。さらに、増殖中のA6細胞では、かなり顕著な核小体の染色が見られ、DUFが核小体中での転写にも関与する可能性が示唆された。

DNA Untwisting/Unwinding Factor(DUF) ひね, double lock DNAに negative <s:1> ひね を plus え, <s:1> double lock を roll 戻す 戻す とによって とによって とによって, in vitroでDNA replication を initiation させる factor と と て, author らによってXenopus oocyte aspiration らによって ら単 isolation された. The <s:1> <s:1> factor サブユニット, 140kDaと, 96kDa <s:1>, two kinds of サブユニット サブユニット1:1 サブユニット ら form る. こ れ ま で で の study, 96 kda サ ブ ユ ニ ッ ト (DUF96) の full ア ミ ノ acid with を decided し, こ れ が マ ウ ス T160 (V (D) J group in え の シ グ ナ ル go に combining す る factor) お よ び ヒ ト SSRP1 (anti-cancer tonic シ ス プ ラ チ ン plus に よ っ て modified さ れ た DNA に combining す る factor) high と い class Similarity を has する とを とを, ら に, に, た. In this study, the で サブユニット and 140kDaサブユニット(DUF140) <s:1> all ア ア ノ acid assortment を determined that た た. The effects of さらに, DUF140に against する antibody を and DNA replication に against する are を as seen in た. (1) DUF140 は budding yeast の CDC68 と を hold ち, N - with about 30% の similarities end nearly く に は, DNA ヘ リ カ ー ゼ モ チ ー フ と like た column が, C - end paying nearly に は acid ア ミ ノ acid に rich む part と nuclear migration シ グ ナ ル と exam え ら れ る salt basic ア ミ ノ の even 続 match column が exist す る こ と が points か っ た. Within (2) the e.c. with our fabrication: oli で 発 now さ せ た DUF140 の part フ ラ グ メ ン ト を antigen と し て, anti - DUF140 antibody を し た. を こ の antibody with い て Xenopus egg cell free extract か ら DUF を except く と, extract の DNA replication activity が 顕 the に reduce す る こ と が points か っ た. Antibody を use い ま た, こ の て Xenopus culture cell A6 を dyeing す る と の cell は で raised colonization, low density, strong nuclear が く dyeing さ れ た が, high-density の cell で は nuclear の dyeing が reduce す る こ と が points か っ た. <s:1> <s:1> と, DUF quantity が cell proliferation energy と close contact に association する とを とを とを hint する. さ ら に, raised in the colonization の A6 cells で は, か な り 顕 the な nucleosome の dyeing が see ら れ, DUF が in nucleosome で の planning write に も masato and す が る possibility in stopping さ れ た.

项目成果

Yoshida,T.: "Microinjection of intact MAP-4 and fragments induces changes of the cytoskeleton in PtK2 cells" Cell Motil.Cytoskel.33. 252-262 (1996)

Yoshida,T.：“完整 MAP-4 和片段的显微注射可诱导 PtK2 细胞中细胞骨架的变化”Cell Motil.Cytoskel.33。

Liliom,K.: "Xenopus oocytes express multiple receptors for LPA-like lipid mediators" Am.J.Physiol.39. c772-777 (1996)

Liliom,K.：“非洲爪蟾卵母细胞表达 LPA 样脂质介质的多种受体”Am.J.Physiol.39。

Higashiyama,T.: "Identification of a novel 70 kDa protein in cultured tobacco cells that is immunologically related to MAP4" Cytologia. 61. 229-233 (1996)

Higashiyama,T.：“培养烟草细胞中与 MAP4 免疫相关的新型 70 kDa 蛋白质的鉴定”Cytologia。

Murakami-Murofushi,K.: "Heat stress induces a glycosylation of membrane sterol in myxoamoebae of a true slime mold,Physarum polycephalum" J.Biol.Chem.272. 486-489 (1997)

Murakami-Murofushi,K.：“热应激诱导真正的粘菌多头绒泡菌的粘液变形虫中膜甾醇的糖基化”J.Biol.Chem.272。

室伏 擴: "チューブリンとモータータンパク質" 実験医学(細胞骨格・細胞運動実験法). (印刷中). (1997)

Hiro Murobushi：“微管蛋白和运动蛋白”实验医学（细胞骨架/细胞运动实验方法）（出版中）。