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がん細胞の二重鎖DNAひねり因子の構造と機能に関する研究

癌细胞中双链DNA扭曲因子的结构与功能研究

基本信息

批准号：
10152209
负责人：
室伏擴
金额：
$ 1.28万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10152209/
关键词：
Xenopus卵 DNA複製 SSRP1 Cdc68 HMGタンパク質 p97ATPアーゼクロマチン

项目摘要

DUFは、二重鎖DNAに結合して二重鎖に負のひねりを加えることによって、二重鎖を局部的に開く活性を持つ因子として、筆者らによってXenopus卵抽出液から初めて精製された。DUFは、出芽酵母のCdc68の類似体とSSRP1(シスプラチンによって修飾されたDNAに結合する因子)とのへテロ二両体である。S期のXenopus卵無細胞抽出液に、精子クロマチンあるいはプラスミドDNAを添加すると、これらを鋳型としてDNA複製が起こる。この系を用いて、DNA複製におけるDUFの機能を解析した。抗-DUF抗体を用いて、卵抽出液からDUFを除くと、精子クロマチンを鋳型としたDNA複製活性が著しく減少した。これに精製DUFを加えると、複製能の回復が見られた。このことはDUFが卵抽出液におけるDNA複製に必須であることを示す。精子クロマチンを卵抽出液に加えると、クロマチンの膨潤に次いで核形成が起き、DNA複製が行われる。卵抽出液中のDUFは核形成時あるいはそれ以後、かつ、DNA複製開始以前に核に取り込まれ、クロマチンと結合することがわかった。抗-DUF抗体を用いた沈降実験により、p97ATPaseがDUFと相互作用するということがわかった。また、p97 ATPaseもDUFとほぼ同じ時期に、再構成された核に取り込まれた。DUF存在下で再構成されたクロマチンDNAは、非存在下のクロマチンDNAよりもヌクレアーゼ感受性が高いことが判明した。さらに、DUFはヒストンに対して強い親和性を示した。DUFはDNAおよびコアヒストンと相互作用して、DNA複製に必要なゆるんだクロマチン構造を作る作用を持つということが示唆される。HeLa cDNAライブラリーからヒトDUF140のクローニングを行っ結果、ヒトとXenopusのDUF140のアミノ酸配列は86%保存されていることがわかった。

DUF, double lock DNA binding, double lock, partial open factor, author, Xenopus egg extract, initial purification DUF is an analog of Cdc68 in budding yeast and SSRP1 (a DNA binding factor) is an analog of Cdc68 in budding yeast. Xenopus ovum cell-free extract, sperm, DNA addition, DNA replication Analysis of the function of DUF in DNA replication. Anti-DUF antibodies are used to remove DUF from egg extracts and reduce DNA replication activity in sperm. Refined DUF can be added and copied. This is the first time that DNA has been cloned. Sperm extract, swelling, nuclear formation, DNA replication When DUF in egg extract is formed, the nucleus is extracted before DNA replication begins. Anti-DUF antibodies are used to inhibit the interaction of DUF with p97ATPase. The p97 ATPase was isolated from the nucleus at the same time. In the presence of DUF, the re-composition of the DNA is high, and in the absence of DUF, the susceptibility is high. The DUF has a strong affinity for the medium. DUF is responsible for DNA replication and interaction. HeLa cDNA translation and translation of DUF140 was successfully performed, and 86% of DUF140 cDNA translation and translation of Xenopus was successfully performed.