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Xenipus卵を用いたDNA複製開始機構の研究

利用爪蟾卵研究DNA复制启动机制

基本信息

批准号：
09266201
负责人：
室伏擴
金额：
$ 1.41万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09266201/
关键词：
Xenopus卵 DNA複製 DNA untwisting因子 SSRP1 Cdc68 p97ATPアーゼ

项目摘要

DNA Untwisting/Unwinding Factor(DUF)は、二重鎖DNAに負のひねりを加え、かつ二重鎖を巻き戻すことによって、in vitroでDNA複製を開始させる因子として、筆者らによってXenopus卵抽出液から単離された。DUFは、87kDaと140kDaとの2種のサブユニットから成り、前者はマウスT160(V(D)J組換えのシグナル配列に結合する因子)およびヒトSSRP1(シスプラチンによって修飾されたDNAに結合する因子)と高い類似性を有し、後者は、出芽酵母のG1期における遺伝子発現制御に関わるCdc68pと約30%の相同性を持つことを明らかにした。本研究では、Xenopus卵抽出液中でDUFが精子核に取り込まれる時期とDNA複製との時期の関係について調べた。さらに、Xenopus卵抽出液中に、DUFと相互作用する因子を探索した。(1)Xenopus卵抽出液に除膜した精子核を加えて、核形成、DUFおよびライセンシング因子であるMCMタンパク質の核への取り込み、また核におけるDNA複製の時期について検討した。その結果、MCMタンパク質が核形成直後に核に取り込まれるのに対し、DUFはDNA複製直前に核に取り込まれることがわかった。(2)抗-DUF140抗体を用いて、Xenopus卵抽出液中にDUFと結合する因子を探索したところ、分子量97kDaの因子が見いだされた。マイクロシークエンシングの結果、この因子はp97ATPアーゼであることがわかった。このATPアーゼは細胞質および核に存在し、細胞質では膜融合に関与することがわかっていたが、核内での機能は不明であった。DUFとp97ATPアーゼが相互作用することから、このATPアーゼがDUFとともにDNA複製に必要なDNAの構造変化に関与する可能性が示唆された。

DNA Untwisting/Unwinding Factor(DUF): DNA Unwinding Factor (DUF): DNA Unwinding Factor DUF has high similarity to T160 (binding factor of V(D)J group) and SSRP1 (binding factor of DNA modification), while DUF has high similarity to Cdc68p and about 30% identity to budding yeast G1 phase. In this study, the relationship between DUF and sperm nucleus extraction and DNA replication in Xenopus ovum extract was studied. To explore the interaction factors in Xenopus ovum extract (1)Xenopus ovum extract is removed from the membrane, sperm nuclei are added, nuclei are formed, DUF and DNA are extracted from the cytoplasm, and DNA replication is carried out during the nuclear process. As a result, MCM DNA is cloned directly into the nucleus, and DUF DNA is cloned directly into the nucleus. (2)Anti-DUF 140 antibody was used to explore DUF binding factors in Xenopus egg extracts. The molecular weight of DUF binding factors was 97kDa. The result of the game is that the game is not easy to play. The ATP is not present in the cytoplasm, but in the nucleus, and its function is unknown. DUF p97 ATP-related interactions indicate the possibility of structural changes necessary for DNA replication.