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Xenopus卵を用いたDNA複製開始機構の研究

利用非洲爪蟾卵研究DNA复制启动机制

基本信息

批准号：
10162202
负责人：
室伏擴
金额：
$ 1.34万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10162202/
关键词：
Xenopus卵 DNA複製 SSRP1 Cdc68 HMGタンパク質クロマチン

项目摘要

DUFは二重鎖DNAに結合して、二重鎖に負のひねりを加えることによって、二重鎖を局部的に開く活性を持つ因子として、筆者らによってXenopus卵抽出液から初めて精製された。DUFは、出芽酵母のCdc68の類似体とSSRP1(シスプラチンによって修飾されたDNAに結合する因子)とのヘテロ二両体である。精製DUFを、種々のニックを持たない弛緩した環状二重鎖DNA溶液に加えると、二重鎖DNAに負のひねりが導入された。また、ひねりの導入にはATPは必要なかった。pSV00CAT DNA(4.6kbp)を用いて、DUF量とひねり数との量的関係を調べたところ、0.9pmolのDUFが、0.07pmolのDNAに負のひねり1つを導入することがわかった。このことは、1分子のDNAを1回ひねりるためには、約13分子のDUFが必要であるということを意味する。Xenopus卵抽出液に環状一本鎖M13DNAを加えると、それを鋳型としてDNA合成が行われ、形成された二重鎖にヒストンが結合してクロマチン構造が作られることが知られている。DUF存在下(mock処理卵抽出液中)および非存在下(抗-DUF抗体でDUFを除いた卵抽出液中)で形成させたクロマチンに対するミクロコッカスヌクレアーゼ感受性を調べたところ、DUF存在下のクロマチンDNAは、非存在下のクロマチンDNAよりもヌクレアーゼ感受性が高いことがわかった。また、ヒストンを固定化したカラムを用いてDUFとヒストンとの相互作用を調べたところ、DUFはヒストンに対して強い親和性を持つことがわかった。DUFはDNAのみならず、コアヒストンとも相互作用して、DNA複製に必要なゆるんだクロマチン構造を作る作用を持つということが示唆される。

The DUF double DNA assay was combined with the double enzyme DNA assay, the double double assay was used to add the partial open activity factor, and the Xenopus egg extract was used to detect the spermatozoa. DUF, sprouting yeast, Cdc68, SSRP1, DNA, DNA and other factors. Fine DUF and several kinds of chemicals are added to the ambient double DNA solution, and the double DNA solution is added to the filter. It is necessary for you to enter your ATP. PSV00CAT DNA (4.6kbp), DUF, DUF, 0.9pmol, DUF, 0.07pmol, DNA, and so on. One molecule of DNA, one molecule of DUF, one molecule of DNA, one molecule of DNA and one molecule of DNA. The environment of Xenopus egg extraction fluid is M13DNA, the synthesis of DNA is of the same type, and the two-fold structure is formed, which is combined with the laboratory data to create a real-time information system. In the presence of DUF (in mock egg extract), in the presence of anti-DUF antibody (DUF), in the extract of egg extract, in the presence of DUF, in the presence of DNA, in the presence of DUF, in the presence of DNA, in the presence of non-presence, in the presence of anti-DUF antibody, in the extract of egg, in the presence of DUF, in the presence of DUF, in the presence of DNA, in the presence of non-presence, in the presence of DNA, in the presence of non-presence, and in the presence of non-presence. Immobilization, immobilization, DUF interaction, DUF immobilization, and sexual retention. DUF, DNA, interaction, and DNA replication are necessary.