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がん細胞のDNA複製における二重鎖DNAひねり因子の機能に関する研究

双链DNA扭曲因子在癌细胞DNA复制中的作用研究

基本信息

批准号：
12215033
负责人：
室伏擴
金额：
$ 2.75万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12215033/
关键词：
HeLa細胞 Xenopus卵 DNA複製 SSRP1 Cdc68 FACT クロマチン HMGタンパク質

项目摘要

申請者らは、ツメガエル卵抽出液からDNA複製開始に必要なDNAひねり因子を精製した。この因子は、分子量140kDa(Cdc68タンパク質の類似体)と87kDa(hSSRP1の類自体)のポリペプチド鎖から成り、二重鎖DNAに負のねじれを導入する活性を持つ。本研究では、培養ヒトがん細胞のDNAひねり因子の発現と精製を行い、二重鎖DNAおよびヌクレオソームの構造に対する影響を調べる。さらに、DNAひねり因子と相互作用する因子を探索し、これら因子の、細胞のがん化に伴う動態と機能の変化を調べる。以上の実験により、がん細胞のDNA複製機構の特異性を明らかにすることを目的とした。DNAひねり因子の140kDaサブユニットにHisタグを付加したクローンと、hSSRP1のクローンをバキュロウイルスに組み込み、両サブユニットを共発現させ、Niキレートカラム、SP、およびHAカラムを用いて精製した。今後、クロマチン構造をとったSV40 DNAのin vitroでの複製に対するDNAひねり因子の作用を解析する予定である。両サブユニットに対する抗体を用いて、HeLa細胞とヒト二倍体繊維芽細胞を染色したところ、核全体、特に、核小体が染色された。HeLa細胞から単離された核にはDNAひねり因子が結合しており、高塩濃度溶液によって抽出された。抗体を用いてDNAひねり因子を除いたツメガエル卵抽出液中で形成されたクロマチンと、DNAひねり因子を含む卵抽出液中で形成されたクロマチンとに対するヌクレアーゼ感受性を調べたところ、前者よりも後者のほうが感受性が高かった。さらに、精製DNAひねり因子は、二重鎖DNAのみならず、ヒストンを固定化させたカラムに結合した。以上の結果から、DNAひねり因子は、DNAおよびヒストンに結合してクロマチン構造をゆるめ、DNA複製が起こりやすくする働きがある考えられる。

It is necessary to use the DNA assay factor at the beginning of the DNA copy of the egg extract fluid of the applicant. The molecular weight (140kDa), molecular weight (140kDa), molecular weight (hSSRP1), molecular weight, molecular weight, molecular weight and molecular weight were determined. The purpose of this study is to determine the effects of DNA factors on the quality of the cells in this study. The results show that there are two factors in this study, such as the quality of the cells, the factors of the DNA, the factors of this study, and the results of the study. The interaction between DNA and other factors, such as exploration, exploration, and cell transformation, is accompanied by the activation of dynamic mechanisms. The DNA replication machine of the above-mentioned information and equipment cells specifically indicates that the purpose of the copy machine is not correct. The DNA factor, the 140kDa factor, the Ni factor, the SP factor, the SP factor, the SP From now on, you will need to SV40 DNA the in vitro to copy the DNA to determine the effect of the factor. The antibodies were stained with antigens, HeLa cells, diploid germ cells, nuclei, nuclei, nucleosomes, nucleosomes. The HeLa cell is isolated. The nuclear DNA factor is combined with the temperature, the high temperature solution and the extraction temperature. The antibody was used to remove the formation of the egg extract in the egg extract with the antibody DNA factor, and the DNA factor contained the egg extract in the egg extract to form the egg extract in the egg extract. The DNA factor, the double DNA factor, the immobilization factor and the immobilization factor. The results of the above results, DNA data factor, DNA response factor, and DNA copy are used in combination with each other to improve the performance of the system.