DNAと蛋白質の相互作用からみたセントロメア/動原体の機能分子構造

DNA-蛋白质相互作用视角下着丝粒/动粒的功能分子结构

• 批准号: 08277222
• 负责人: 杉本 憲治
• 金额: $ 0.9万
• 依托单位: Osaka Prefecture University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08277222/
• 关键词: セントロメア; 動原体; DNA蛋白質; 機能分子構造

1.セントロメア蛋白質が結合するDNAについてヒトCENP-Bについてはセントロメア領域のDNAに存在する幾つかの配列に結合することが知られているが、その結合配列の詳細は不明であった。そこで、先に開発した「ヒト組換え体CENP-Bを用いたDNAアフィニティー沈降法」を用いて,新たに結合する配列を20個程同定した。また,同様の手法を用いて,ヒトゲノムライブラリーより、直接,CENP-Bの結合する配列として「セントロメアDNA」を複数単離した。一つは染色体6番に由来するもので,その3kbの繰り返しにおけるCENP-Bの結合配列の分布を正確にマップした。今一つは複数の染色体のセントロメアに局在性を示すもので,現在,解析中である.2.セントロメア蛋白質間の相互作用についてCENP-CとHP1の分子間相互作用について,DSSを用いた化学架橋法あるいは,ゲル濾過法により解析を行った.その結果,CENP-Cは中央のDNA結合領域に加えて,C末端に二量体形成領域が存在することが明らかとなった.N末端にも自己会合能の存在が示唆された.また,HP1についても,中央のDNA結合領域に加えて,自己会合能を持つ可能性が示された.3.その他のセントロメア蛋白質についてCENP-A蛋白質のDNA結合能を解析するため,そのcDNAをクローン化した現在,組換え体蛋白質を発現させ,その機能の解析を行っている.

1. DNA binding to proteins in the CENP-B domain is unknown in detail, and DNA binding to proteins in the CENP-B domain is unknown in detail. The first step is to use CENP-B as a new DNA binding agent. In addition, the same method is used, such as direct,CENP-B binding, and multiple isolation. The origin of chromosome 6 was detected, and the distribution of CENP-B binding was correctly detected. 2. The interaction between protein and protein. The interaction between CENP-C and HP1. DSS was analyzed by chemical bridging method. As a result,CENP-C has a central DNA binding domain, a C-terminal two-dimensional domain, and an N-terminal self-binding domain. In addition,HP1 is a member of the DNA binding domain, and the possibility of its own binding energy is shown. 3. The DNA binding energy of CENP-A protein is analyzed, and the cDNA is transformed into protein, and the function of protein is analyzed.

项目成果

K.Sugimoto, K.Furukawa, and M.Himeno: "Functional cloning of centromere protein B (CENP-B) box-enriched alphoid DNA repeats utilizing the sequence-specific DNA binding activity of human CENP-B in vitro." Chromosome Research. 2. 453-459 (1994)

K.Sugimoto、K.Furukawa 和 M.Himeno：“利用人类 CENP-B 的序列特异性 DNA 结合活性，在体外对富含着丝粒蛋白 B (CENP-B) 盒的 alpoid DNA 重复序列进行功能性克隆。”

Kenji Sugimoto: "DNA immunoprecipitation : Application to characterization of target sequences for a human centromere DNA-binding protein (CENP-B). in ″Cell Biology : A Laboratory Handbook″" J. E. Celis, Academic Press, 9 (1994)

Kenji Sugimoto：“DNA 免疫沉淀：应用于人类着丝粒 DNA 结合蛋白 (CENP-B) 靶序列表征。《细胞生物学：实验室手册》” J. E. Celis，学术出版社，9 (1994)

K.Sugimoto, Y.Muro, M.Ohashi, and M.Himeno.: "Scleroderma diagnosis with recombinant protein. in ″Encyclopedia of Molecular Biology and Molecular Medicine″." R. A. Meyers, VCH Publishers, 11 (1997)

K.Sugimoto、Y.Muro、M.Ohashi 和 M.Himeno.：“用重组蛋白诊断硬皮病。《分子生物学和分子医学百科全书》”，R.A. Meyers，VCH 出版社，11 (1997)

Kenji Sugimoto: "DNA-protein interaction involed in centromere heteochromatin organization of human chromosome." Viva Origino. 24. 211-224 (1996)

Kenji Sugimoto：“DNA-蛋白质相互作用涉及人类染色体着丝粒异染色质组织。”

K.Sugimoto, H.Yata, Y.Muro, and M.Himeno: "Human centromere protein C (CENP-C) is a DNA-binding protein which possesses a novel DNA-binding motif." Journal of Biochemistry. 116. 877-881 (1994)

K.Sugimoto、H.Yata、Y.Muro 和 M.Himeno：“人类着丝粒蛋白 C (CENP-C) 是一种 DNA 结合蛋白，具有新颖的 DNA 结合基序。”