DNAと蛋白質の相互作用からみたセントロメア/動原体の機能分子構造

DNA-蛋白质相互作用视角下着丝粒/动粒的功能分子结构

• 批准号: 09266217
• 负责人: 杉本 憲治
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Osaka Prefecture University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09266217/
• 关键词: セントロメア; 動原体; アルホイド; CENP-A; CENP-B; CENP-C; HP-1

1.CENP-AとHP1の機能構造ヒトヘテロクロマチン蛋白質HP1^<HSα>については、in vitroの解析ではあるが,N末端とC末端領域に自己会合能が認められた。また,GFPを指標に用い,in vivoにおいてもそれに対応する活性,すなわち,セントロメアへの局在性が認められた。CENP-Aについては、大腸菌による発現が非常に困難であるため,出芽酵母を用いた宿主ベクター系に変更し、その発現に成功した。2.アフィニティーDNA沈降法によるセントロメアDNAの単離CENP-B蛋白質については,アフィニティー沈降法を用い,ヒトゲノムライブラリーより単離したcos2クローンについて,由来する染色体,並びに,CENP-B結合配列の分布を解析した。この配列は染色体6番のセントロメア領域に由来し,その3kbの高次繰り返し中には7-8個のCENP-B結合配列を含み,かつ,結合配列に富む1kbの領域は他のグループにより単離されている同染色体由来のアルホイドの高次繰り返しにもよく保存されていることが判明した。また,CENP-Bの結合配列について、新たに43種の合成オリゴDNAを用いてその結合に必要なDNAの大きさ,塩基の特異性を決定した。これらは,その結合の強さにより4つのクラスに分類された。3.新たなセントロメア蛋白質をコードする遺伝子の単離動原体内層を構成する蛋白質として知られるCENP-A,Cについて,これと相互作用するような新たなセントロメア蛋白質を同定するため,出芽酵母のtwo-hybridシステムを用いてヒトcDNAライブラリーのスクリーニングを行った。これらについては現在解析中である。

1.CENP-A and HP1 functional structure, protein HP1^<HSα>, in vitro analysis, N-terminal and C-terminal domain, self-assembly ability The GFP indicator is used in vivo, and in vivo. CENP-A is very difficult to develop, and budding yeast is successful in developing. 2. DNA sedimentation method is used to analyze the distribution of CENP-B protein, CENP-B protein binding and alignment. The sequence of this gene is 6 kb in the region of origin, 3kb in the region of origin, 7-8 in the region of CENP-B binding, and 1kb in the region of binding. In addition,CENP-B binding sequences are new to the synthesis of 43 DNA species, and the specificity of DNA binding is determined by the size of DNA binding. This is because the combination of strong and weak is classified into four categories. 3. The protein structure of the novel hybrid protein is determined by the interaction between CENP-A,C and the protein structure of the novel hybrid protein. The two-hybrid protein structure of budding yeast is used by cDNA structure.これらについては现在解析中である。

项目成果

Sugimoto,K.,Shibata,A.,and Himeno,M.: "Nucleotide specificity at the boundary and size requirement of the target sites recognized by human centromere protein B(CENP-B)in vitro." Chromosome Research. 6(印刷中). (1998)

Sugimoto, K.、Shibata, A. 和 Himeno, M.：“体外人类着丝粒蛋白 B (CENP-B) 识别的靶位点的核苷酸特异性（印刷版）。” ）（1998）

Sugimoto,K.,Kuriyama,K.,Shibata,A.,and Himeno,M.: "Characterization of internal DNA-binding and C-terminal dimerization domains of human centromere/kinetochore autoantigen CENP-C in vitro:role of DNA-binbding and self-associating activities in kinetochore

Sugimoto,K.、Kuriyama,K.、Shibata,A. 和 Himeno,M.：“人着丝粒/着丝粒自身抗原 CENP-C 的内部 DNA 结合和 C 末端二聚化结构域的体外表征：DNA-的作用

Sugimoto,K.,Furukawa,K.,Kusumi,K.,and Himeno,M.: "The distribution of binding sites for centromere protein B(CENP-B)is partly conserved among diverged higher order repeating units of human chromosome 6-specific alphoid DNA." Chromosome Research. 5. 395-40

Sugimoto, K.、Furukawa, K.、Kusumi, K. 和 Himeno, M.：“着丝粒蛋白 B (CENP-B) 的结合位点分布在人类 6 号染色体的不同高级重复单元中部分保守。

Sugimoto,K.,Kuriyama,K.,Himeno,M.and Muro,Y.: "Epitope mapping of human centromere autoantigen centromere protein C(CENP-C):Heterogeneity of anti-CENP-C response in rheumatic diseases." Journal of Rheumatology. 25(印刷中). (1998)

Sugimoto, K.、Kuriyama, K.、Himeno, M. 和 Muro, Y.：“人类着丝粒自身抗原着丝粒蛋白 C (CENP-C) 的表位作图：风湿性疾病中抗 CENP-C 反应的异质性。”风湿病学 25（正在出版）（1998）。