マラリア制圧に不可欠なグルコース・6ーリン酸脱水素酵素異常症の分子異常の同定

鉴定对于控制疟疾至关重要的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶疾病的分子异常

• 批准号: 08281213
• 负责人: 藤井 寿一
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Tokyo Women's Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08281213/
• 关键词: 赤血球酵素異常症; グルコース-6ーリン酸脱水素・酵素異常症; プリマキン; 藻剤惹起性溶血発作; スクリーニング法; 変異酵素; ミスセンス変異; PCR-SSCP法

グルコース-6ーリン酸脱水素酵素(G6PD)異常症は変異酵素によっはプリマキンなどの酸化作用を有する薬剤の服用後に溶血発作を来すため、マラリア制圧上重要な問題となっている。そこで、今年度は新しいG6PD異常症のスクリーニング法を開発した。先ず、DEAE-Sephadex、基質G6P、補酵素NADP、MTT、PMSを含む酵素反応チューブを作製する。これに全血5μlを加え、よく混和後、室温に静置する。G6PD活性が正常である場合は20〜40分後にDEAE-Sephadex層がブルーの色調を帯びてくるが、活性が正常の10%以下である場合は全く色調の変化が見られない。本法は手技が簡単で、多数検体の処理が可能で、特殊な装置が全く不要で、数十分でG6PD異常症の診断が可能である。従って、フィールドでマラリア治療薬投与の可否を日を改めずに決定することが可能となった。次いで、マラリアの流行地域であるパプアニューギニアにおけるG6PD異常症の分子異常を同定した。パプアニューギニアの295名(男性120、女性175、総数470アリル)の遺伝子DNAを抽出し、部分イントロン配列を含む全翻訳領域をPCR法にて増幅したのち、nonRI-SSCP法にて遺伝子変異のスクリーニングを行った。異常なSSCPパターンを示す部位は蛍光ヌクレオチドを用いる直接シークエンス法にて塩基配列を決定した。遺伝子解析の結果、(1)110T→C(37Met→Thr)変異1アリル、(2)IVS-2 37A A→G変異アリル、(3)243 C→T(81 Arg→Arg)変異2アリル、(4)1360 C→T(454 Arg→Cys)変異1アリル、(5)IVS-11 17G→A変異4アリルの5種類の単一塩基置換を同定した。1360 C→T変異は東南アジア〜メラネシアに広く分布する古い起源の変異酵素(G6PD Maewo)で、パプアニューギニアにも存在することが予想されたが、他は新しい変異である。

グ ル コ ー ス - 6 ー リ ン acid dehydration vegetable enzyme (G6PD) abnormal disease は - isoenzymes に よ っ は プ リ マ キ ン な ど の acidification を have す る 薬 tonic の after taking に を in terms of the hemolysis 発 す た め, マ ラ リ ア system on important な 圧 と な っ て い る. Youdaoplaceholder0 グ で, this year <s:1> new <s:1> G6PD abnormality <s:1> ス リ ニ ニ グ グ グ method を issued た. First, ず, DEAE-Sephadex, substrate G6P, enzyme NADP, MTT, and PMSを containing む enzymes were used to reverse 応チュ and ブを to prepare する. <s:1> れに whole blood 5μlを mixed with え and よく, then left to stand at room temperature に する. G6PD activity が normal で あ る occasions は 20 to 40 minutes after に DEAE Sephadex - layer が ブ ル ー の tonal を 帯 び て く る が, active が の below 10% normal で あ る occasions は full く tonal の variations change が see ら れ な い. This law は manipulation が Jane 単 で, most 検 の 処 が may で, special devices な が く don't で, scores points で G6PD が の abnormal disease diagnosis may で あ る. 従 っ て, フ ィ ー ル ド で マ ラ リ ア treatment can cast and の 薬 を day changes を め ず に decided す る こ と が may と な っ た. The secondary で で, ラリア ラリア, <s:1> epidemic area であるパプアニュ ギニアにおける ギニアにおけるG6PD abnormality <s:1> molecular abnormality を is determined to be た た. パ プ ア ニ ュ ー ギ ニ ア の 295 (male 120, female 175, 総 number 470 ア リ ル) の heritage 伝 DNA を drew し, part イ ン ト ロ ン match column を containing む full turn 訳 field を PCR method に て rights of し た の ち, nonRI - SSCP method に て heritage 伝 sub - different の ス ク リ ー ニ ン グ を line っ た. Abnormal な SSCP パ タ ー ン を す parts in は 蛍 light ヌ ク レ オ チ ド を with い る directly シ ー ク エ ン ス method に て salt base with column を decided し た. (1)110T→C(37Met→Thr) variation 1アリ アリ, (2)IVS-2 37A A→G variation アリ アリ, (3)243 C→T(81 Arg→Arg) variation 2アリ アリ, (4)1360 C→T(454) Arg - > Cys) - different 1 ア リ ル, (5) 17 g IVS - 11 - A - 4 different ア リ ル の 5 kinds の 単 one salt base displacement を with fixed し た. C - T - 1360 different は southeast ア ジ ア ~ メ ラ ネ シ ア に hiroo く distribution す る ancient origin の い - isoenzymes (G6PD) Maewo で, パ プ ア ニ ュ ー ギ ニ ア に も exist す る こ と が to think さ れ た が, he は new し い - different で あ る.

项目成果

Fujii,H.,and Miwa,S.: "Advances in Clinical Chemistry" Red blood cell enzyme and their clinical utility.(in press),

Fujii,H. 和 Miwa,S.：“临床化学进展”红细胞酶及其临床实用性。（出版中），

Hirono,A.,Kanno,H.,Fujii,H.,Miwa,S.,et al.: "Three cases of hereditary nonspherocytic hemolytic anemia associated with red cell glutathione deficiency." Blood. 87. 2071-2074 (1996)

Hirono,A.、Kanno,H.、Fujii,H.、Miwa,S.等人：“与红细胞谷胱甘肽缺乏症相关的遗传性非球形细胞溶血性贫血的三例。”

Kanno,H.,Fujii,H.,Hirono,A.,Miwa,S.,et all.: "Molecular analysis of glucose phosphate isomerase deficiency associated with hereditary hemolytic anemia." Blood. 88. 2321-2325 (1996)

Kanno,H.、Fujii,H.、Hirono,A.、Miwa,S.等人：“与遗传性溶血性贫血相关的葡萄糖磷酸异构酶缺乏症的分子分析。”

Hirono,A.,Fujii,H.,and Miwa,S.: "Molecular analysis of eight Japanese biochemically unique glucose-6-phosphate dehydrogenase variants." Blood. (in press).

Hirono,A.、Fujii,H. 和 Miwa,S.：“八种日本生化独特的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶变体的分子分析。”

Miwa,S. and Fujii.H.: "Molecular basis of erythroenzymopathies associated with hereditary hemolytic anemia:Tabulation of mutant enzyme." Amer.J.Hemat.51. 122-132 (1996)

美轮，S.