グルコースー6-リン酸脱水素酵素異常症の遺伝子レベルでの病因解析

6-磷酸葡萄糖脱氢酶障碍的基因水平病因分析

• 批准号: 62571019
• 负责人: 藤井 寿一
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Tokyo Women's Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1987
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1987 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-62571019/
• 关键词: 遺伝性溶血性貧血; 赤血球酵素異常症; グリコースー6-リン酸脱水素酵素異常症

グルコースー6-リン酸脱水素酵素(G6PD)異常症は世界で1億人以上が本症の異常遺伝子を持つと考えられ, 最も頻度の高い代謝異常症である. われわれはわが国において90家系のG6PD異常症を発見してきた. 病因は患者酵素の酵素学的, 生化学的性状より変異酵素の産生によることが最も考えられるが, その詳細は不明である. 正常酵素に関しては昨年度, 米国吉田昭博士らにより相補的DNA(cDNA)のクローニングおよび塩基配列の決定がなされた. われわれはこのcDNAの供与を受けたので, これをプローブとしてG6PD異常症の遺伝子レベルでの病因解明を試みた. 方法はG6PD異常症患者のリンパ球を株化し, そのメッセンジャーRNA(mRNA)をcDNAクローニングの材料に用いてmRNAの全構造を解析する方法をとった. この方法により, われわれは佐賀医大向井博士らと共同でアルドラーゼ(ALD)異常による遺伝性溶血性貧血の遺伝子レベルでの異常を解明した. すなわち, AUGから386番目に一塩基の置換(A→G)がみられた. その結果, 128番目のアスパラキン酸(GAU)がグリシン(GGU)へのアミノ酸置換が起っていることが判明した. さらに, 酵素活性や熱安定性にこの変異が直接かかわっていることを, 大腸菌発現系のベクターを用いて明らかにした. G6PD異常症に関しては, わが国における頻度が約0.1%と考えられるG6PD Ubeと, 特異な基質親和性を示すG6PD Kobeのリンパ芽球を大量培養し, ポリARNAを調製し, λgt10をベクターとしてcDNAライブラリーを作製した. このライブラリーのスクリーニングを行っているが, 現在迄に陽性クローンは得られていない. G6PDはALDc比較するとmRNA含量が少ない事が原因と考えられるが, 現在引き続いてスクリーニングを繰り返している.

グ ル コ ー ス ー 6 - リ ン acid dehydration vegetable enzyme (G6PD) abnormal disease は world で が this disease の abnormal heritage of over 100 million people 伝 son を hold つ と exam え ら れ, most も high frequency の い metabolic abnormalities disease で あ る. わ れ わ れ は わ が countries に お い て 90 family の G6PD abnormal disease を 発 see し て き た. Cause は の patients enzyme enzyme, biochemical traits よ り - isoenzymes の produce に よ る こ と が most も exam え ら れ る が, そ の detailed は unknown で あ る. Normal enzymes に masato し て は last year, the us yoshida, Dr Zhao ら に よ り phase of DNA (cDNA) の ク ロ ー ニ ン グ お よ び salt base with column の decided が な さ れ た. わ れ わ れ は こ の cDNA の を and supply by け た の で, こ れ を プ ロ ー ブ と し て G6PD abnormal disease の heritage 伝 son レ ベ ル で の causes interpret を try み た. Methods は G6PD abnormal patients の リ ン パ ball を strains し, そ の メ ッ セ ン ジ ャ ー RNA (mRNA) を cDNA ク ロ ー ニ ン グ の material に with い て mRNA の whole structure を parsing す る method を と っ た. こ の way に よ り, わ れ わ れ は saga university to Dr Wells ら と common で ア ル ド ラ ー ゼ (ALD) abnormal に よ る heritage 伝 sex hemolytic anemia の posthumous son 伝 レ ベ ル で の abnormal を interpret し た. す な わ ち, AUG か ら 386 times A salt base mesh に の replacement (A - G) が み ら れ た. そ の results, 128's mesh の ア ス パ ラ キ ン acid (GAU) が グ リ シ ン (GGU) へ の ア ミ ノ acid replacement が up っ て い る こ と が.at し た. さ ら に, enzyme activity of thermal stability に や こ の - different が directly か か わ っ て い る こ と を, Coliform 発 now is の ベ ク タ ー を with い て Ming ら か に し た. G6PD abnormal disease に masato し て は, わ が countries に お け る frequency が about 0.1% と exam え ら れ る G6PD Ube と, specific な substrate affinity を shown す G6PD Kobe の リ ン パ gemmule を mass culture し, ポ リ ARNA を し modulation, Lambda gt10 を ベ ク タ ー と し て cDNA ラ イ ブ ラ リ ー を cropping し た. こ の ラ イ ブ ラ リ ー の ス ク リ ー ニ ン グ を line っ て い る が, now to effect positive に ク ロ ー ン は have ら れ て い な い. G6PD は ALDc compare す る と mRNA content less が な い が reason と exam え ら れ る が, Now turn on 続 続 てス てス リ リ ニ <e:1> グを グを to return to て て る る.

项目成果

Tani K,Fujii H,Nagata S,Miwa S: Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America.

Tani K、Fujii H、Nagata S、Miwa S：美国国家科学院院刊。

Kondo T,Ohtsuka Y,Shimada M,Kawakami Y,Hiyoshi Y,Tsuji Y,Fujii H,Miwa S: American Journal of Hematology. 26. 37-45 (1987)

Kondo T，Ohtsuka Y，Shimada M，Kawakami Y，Hiy​​oshi Y，Tsuji Y，Fujii H，Miwa S：美国血液学杂志。

Hirono A,Fujii H,Natori H,Kurokawa I,Miwa S: British Journal of Haematology. 65. 35-41 (1987)

Hirono A、Fujii H、Natori H、Kurokawa I、Miwa S：英国血液学杂志。