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グルコ-スー6ーリン酸脱水素酵素変異種を指標としたわが国への遺伝子移子移込の検討

考虑使用葡萄糖-6-磷酸脱氢酶变体作为指标将基因转移到日本

基本信息

批准号：
02671048
负责人：
藤井寿一
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Tokyo Women's Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

グルコ-スー6ーリン酸脱水素酵素(G6PD)異常は、薬剤惹起性溶血発作ないし慢性溶血を伴うことのある赤血球酵素異常症であるが、大半は何ら臨床症状は呈さない。本酵素異常はアフリカ、地中海沿岸、東南アジアにおいて特に頻度が高く、世界で4億人以上が本酵素の異常遺伝子をもつと考えられている。G6PD異常症の病因解明は世界各国で進んでおり、既に20種の変異酵素遺伝子で塩基置換が同定されている。今年度はわが国で比較的頻度が高いG6PD UbeとG6PD Konanなどの変異酵素遺伝子が既知の塩基置換を有しているかどうかをpolymerase chain reaction法(PCR法)を用いて検索し、わが国で発見した変異G6PDと諸外国、特に東南アジアで頻度が高い変異酵素との異同を遺伝子レベルで検討し、わが国への遺伝子移入を明かにする事を目的に研究を進めた。G6PD Konan、G6PD Tokyoおよび未同定の2例の変異酵素を有するG6PD異常症患者白血球より染色体DNAを精製し、塩基置換により制限酵素切断部位の変化しているG6PD A^+、G6PD A^ー、G6PD Mahidol、G6PD Metaponto、G6PD Riverside、G6PD Tomah、G6PD Beverly Hillsの7種の変異酵素に特異的な各塩基置換部位を含む80〜400bpの塩基配列を、合成オリゴヌクレオチドプライマ-(22ーmer)を用いたPCR法にて増幅した。増幅DNAは各変異部位に特異的な制限酵素で処理したのち、ポリアクリルアミドゲル電気泳動にて分離、銀染色法により検出し、制限酵素切断パタ-ンより各塩基置換の有無を判定した。今回、対象とした4種の日本人G6PD変異酵素遺伝子DNAは、検索した7種の変異酵素遺伝子DNAに特異的な制限酵素切断パタ-ンは見られず、既知の塩基置換を有していない事が明らかになった。すなわち、これら4種の日本人G6PD異常症の病因は未知の部位の塩基置換で、日本人に固有の変異酵素である事が強く示唆された。現在、これら日本人の変異G6PD遺伝子について、変異部位の決定を進めている。

Abnormality of G6PD enzyme causes chronic hemolysis, which is accompanied by abnormal erythrocyte enzymes. Most of the clinical symptoms are present. Abnormality of this enzyme occurs frequently along the Mediterranean coast and in the southeast. More than 400 million people in the world are involved in this enzyme abnormality. The etiology of G6PD disorders has been clarified worldwide, with 20 different enzyme genes and gene substitutions identified. This year, the frequency of comparison between different countries is high, and the frequency of comparison between different enzymes is high. The frequency of comparison between different enzymes in different countries is high. G6PD Konan, G6PD Tokyo, and 2 unidentified cases of heteroenzymes. Chromosomal DNA purification, base substitution, restriction enzyme cleavage site transformation, G6PD A^+, G6PD A^+, G6PD Mahidol, G6PD Metaponto, G6PD Riverside, G6PD Tomah, and G6PD Beverly Hills. The synthesis of DNA by PCR was studied. Amplitude DNA is processed by restriction enzymes specific to different sites, and the presence or absence of restriction enzyme substitutions is determined by electrophoresis and silver staining. In this paper, four kinds of Japanese G6PD enzyme DNA are detected, seven kinds of different enzyme DNA are detected, and specific restriction enzyme is detected. The etiology of G6PD abnormalities in Japanese is strongly indicated by gene substitutions at unknown sites and by enzymes inherent in Japanese. Now, the Japanese have different G6PD heritage, different parts of the decision to enter the process.