成人T細胞白血病に対する遺伝子工学を用いた治療法の開発

利用基因工程开发成人 T 细胞白血病的治疗方法

• 批准号: 09255248
• 负责人: 松岡 雅雄
• 金额: $ 1.73万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09255248/
• 关键词: 成人T細胞白血病; アポトーシス; ヒトリンパ向性ウイルスI型; Fasリガント; Fas抗原

1)Fas陰性ATL細胞の抗癌剤耐性Fas陰性の表現形質と抗癌剤耐性の関連を検討するためFas陰性のATL細胞を用いてdoxorubicinによるアポトーシス誘導をin vitroで検討した。Fas抗原陽性のATL細胞ではdoxorubicin(4mM)の添加によって2時間後に16%、6時間後に52%のアポトーシスが観察されたのに対してFas陰性のATL細胞ではアポトーシスは誘導されなかった。コントロールである抗Fas抗体(CH-11)でも同様の結果であった。Fas抗原からのシグナルに対して抵抗性であるだけでなくアポトーシスの他のカスケードにも異常が存在することが明らかとなった。このような異常はATLにおける抗癌剤耐性とも関連していると考えられる。2)Activation induced cell deathの際に誘導されるべきFas LはATLでは刺激後(ConA+PMA)も全く検出されずFas Lの発現抑制の機序があるのではないかと考えメチル化の有無を検討した。メチル化の検討はgenomic DNAをsodium bisulfiteで処理しCpGでメチル化が起こっている場合にはCのTへの変換が阻害されることを利用したmethylation specific PCR(MSPCR)を用いた。Fas Lではexon1にCpG islandが存在しておりMSPCRによってATLのFas L遺伝子ではメチル化が確認された。正常人単核球ではmethylationとunmethylationの混在するパターンでありmethylationのみが検出されるATL細胞とは明らかな相違が存在した。3)細胞レベルにおけるFas L遺伝子の発現制御を可能にするためにHIVベクターを用いて誘導可能なプロモタ-でFasL遺伝子の発現を誘導する系を作成した。HIVベクターのLTRはtatの非存在下では働かず導入細胞内では転写が起こらない。誘導可能な発現系としてはVP-16とmutant tetracycline repressorの融合遺伝子でtetracyclineで発現が誘導される系を用いた。tetOをFasL遺伝子の蒸留に連結しFasL遺伝子の転写をテトラサイクリンで誘導するベクターを作成した。

1) The relationship between Fas negative phenotype and anti-cancer resistance in Fas negative ATL cells induced by doxorubicin was studied in vitro. Fas antigen-positive ATL cells were induced by doxorubicin(4mM) in 16% and 52% of the total response after 2 and 6 hours respectively. The anti-Fas antibody (CH-11) is the same result. Fas antigen is not immune to disease. This is an exception to ATL. 2)Activation induced cell death at the time of induction of Fas L anti-ATL after stimulation (ConA+PMA) and all detection of Fas L anti-activation inhibition mechanism. The use of methylation specific PCR(MSPCR) in the treatment of genomic DNA in the presence of sodium bisulfite. Fas L gene exon1 CpG island exists in MSPCR and Fas L gene exon 1 CpG island exists in MSPCR and Fas L gene exon 1 CpG island. In normal human nuclei, methylation and unmethylation are mixed, and ATL cells are mixed. 3)The system for inducing the expression of Fas L gene was established. In the absence of HIV, the LTR is introduced into the cell. The induction system may be used to induce the development of VP-16 and mutant tetracycline repressor fusion genes. TetO, FasL, Evaporation, Link, FasL, Evaporation, Link, Link, Evaporation, Link, Link, Evaporation,

项目成果

Arai, M., et al.: "Expression of FAP-1(Fas associated phosphatase)and resistance to Fas-mediated apoptosis in T cell lines derived from human T cell leukemia virus type 1-ssociated myelopathy/tropical spastic paraparesis patients." AIDS Res Human Retrovir

Arai, M., 等人：“源自人 T 细胞白血病病毒 1 型相关脊髓病/热带痉挛性截瘫患者的 T 细胞系中 FAP-1（Fas 相关磷酸酶）的表达和对 Fas 介导的细胞凋亡的抵抗力。”

Takemoto, S., et al.: "Proliferation of adult T cell leukemia/lymphoma cells is associated with the constitutive activation of JAK/STAT proteins." Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 94. 13897-13902 (1997)

Takemoto, S. 等人：“成人 T 细胞白血病/淋巴瘤细胞的增殖与 JAK/STAT 蛋白的组成型激活有关。”

Etoh, K-I., et al.: "Persistent clonal proliferation of human T-lymphotropic virus type I-infected cells in vivo." Cancer Res. 57. 4862-4867 (1997)

Etoh, K-I. 等人：“人 T 淋巴细胞病毒 I 型感染细胞在体内的持续克隆增殖。”

Tamiya, S., et al.: "Mutation of CD95 (Fas/Apo-1) genes in adult t-cell leukemia cells." Blood. (in press).

Tamiya, S. 等人：“成人 T 细胞白血病细胞中 CD95 (Fas/Apo-1) 基因的突变。”