EBウイルスベクターを用いたエイズワクチンに関する研究

利用EB病毒载体进行艾滋病疫苗的研究

• 批准号: 09258201
• 负责人: 今井 章介
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09258201/
• 关键词: EBウイルス; エイズ; ワクチン; ウイルスベクター; 免疫療法

EBV DNAのBamHI-X断片を含むXbaI断片12.3kbpのSmaI部位へHIVのenv、rev及びネオマイシン抵抗性遺伝子(全体で6.3kbp)を挿入したプラスミドを作製した。得られたプラスミドをAkata細胞(細胞当たり約20コピーのEBVプラスミドを含む)へ電気穿孔法により導入した。G418を700mg/ml加えて培養を行い、G418抵抗性の細胞クローンを分離した。Southern blot法により相同組み換えの起こった細胞クローンを同定した。得られた細胞に抗ヒト免疫グロブリン(Ig)抗体を加え、EBウイルス産生を誘導し、24時間後に培養上清を回収した。この上清中には組み換えEBVと共に野生株EBVが含まれる。この混合EBV液をEBV陰性Akata細胞へ感染し、薬剤選択により組み換えEBVのみが感染した細胞クローンを分離した。調べたクローンすべてで組み換えEBVのみが感染していた。組み換えEBVを末梢血リンパ球に感染し、不死化リンパ球を得た。envの発現がWestern blot法により確認された。今後得られた組み換えEBVを用いてHIV特異的CTLを誘導する予定である。

EBV DNA BamHI-X fragment contains XbaI fragment 12.3kbp SmaI site HIV env , rev and びネオマイシンresistant 缝子(overall 6.3kbp)をinsertしたプラスミドをproduced by した. Obtained Akata cells (the cells are approximately 20 コピーのEBV cells containing む) and were introduced into the body by electroporation. G418 can be cultured by adding 700 mg/ml, and G418-resistant cells can be separated and separated. The Southern blot method used the same group of cells and replaced them with the same set of cells. Anti-Hydrocyte immune cells (Ig) antibodies were added and EB antibodies were produced and induced, and the culture supernatant was collected after 24 hours. The EBV in the supernatant and the EBV in the wild strain contain EBV. The mixed EBV solution was used to infect EBV-negative Akata cells, and the EBV-infected Akata cells were isolated from the selected EBV group. Adjust the EBV infection rate for the EBV infection. In the group, EBV was used to infect peripheral blood leukocytes and the immortalized leopards were obtained. The env method is confirmed by Western blot method. From now on, it is scheduled to be induced by HIV-specific CTL in exchange for EBV.

项目成果

Takeuchi,R.: "Respiratory syncytial virus infection of neonatal monocytes stimulates synthesis of interferon regulatory factor-1(IRF-1)and IL-1β converting enzyme(ICE)to secrete IL-1β." J.Virol.in press.

Takeuchi, R.：“新生儿单核细胞的呼吸道合胞病毒感染刺激干扰素调节因子-1 (IRF-1) 和 IL-1β 转换酶 (ICE) 的合成，以分泌 IL-1β。”

Yoshiyama,H: "Implication of the existence of a new virus receptor different from CD21." J.Virol.71(7). 5688-5691 (1997)

Yoshiyama,H：“不同于 CD21 的新病毒受体的存在的意义。”

Sone,S.: "Enhanced cytokine production by milk macrophages follwing infection with respiratory syncytial virus" J.Leukocyte Biol.61. 630-636 (1997)

Sone,S.：“呼吸道合胞病毒感染后乳巨噬细胞产生的细胞因子增强”J.Leukcyto Biol.61。

Imai,S.: "Cell-to-cell contact as an efficient mode of Epstein-Barr virus infection of diverse human epithelial cells." J.Virol.in press.

Imai,S.：“细胞间接触是 Epstein-Barr 病毒感染多种人类上皮细胞的有效模式。”

Kusuhara,K.: "Breast milk is not a signifivant source for early Epstein-Barr virus or human herpesvirus 6 infection in infants:a seroepidemiologic study in 2 endemic areas of human T-cell lymphotropic virus type I in Japan." Microbiol.Immunol.41. 309-312

Kusuhara, K.：“母乳不是婴儿早期 Epstein-Barr 病毒或人类疱疹病毒 6 型感染的重要来源：在日本 2 个人类 T 细胞嗜淋巴细胞病毒 I 型流行地区进行的血清流行病学研究。”