多複製開始点を持つゲノムの複製開始の制御機構-DNAル-ピングとDNAベンディングの機能-

具有多个复制起点的基因组中复制起始的控制机制-DNA成环和DNA弯曲的功能-

• 批准号: 09266204
• 负责人: 犬塚 學
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: 福井医科大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09266204/
• 关键词: 多複製開始点; プラスミドR6K; DNAベンディング; イニシエーター蛋白

細胞複製は染色体の複製、特にその開始反応において制御されているが、多複製開始点をもつゲノムでの複製開始の分子制御機構、特に、開始点間の相互作用は、殆ど解明されていない。そこで、私達は、マルティオリジンをもつR6Kゲノムをモデルレプリコンとして選び、イニシエーターπ蛋白が7イテロンに結合後、2kb以上も離れたoriα,oriβを如何にして活性化するかを解明する。本年は、oriα、γレプリコン複製におけるπ蛋白変異、DnaA蛋白の機能解析より、DNA bendingを含むori構造変化の複製開始と制御への役割を解明した。(1)π蛋白のカルボキシ端領域の機能分析:イニシエーターπ蛋白のpir遺伝子の欠失変異株を構築し、解析することにより、酸性アミノ酸に富むπ蛋白C端領域は複製開始をネガティブに調節する機能を持つことを明示した。(2)宿主イニシエーターDnaA蛋白のR6K複製開始反応における機能-ori構造変化の誘導補助活性の発見:DnaA蛋白の役割を解明するために、DnaA蛋白に非依存的複製をするR6Kプラスミドを分離・解析し、染色体上に存在したIS5がR6K oriγレプリコンDNA上に転移することにより、DnaA蛋白非依存的な複製能を付与できることを発見した。また、ベントDNAの機能分析より、イニシオソーム構築におけるori DNA構造の重要性が示された。これらはDnaA蛋白がπ蛋自によるori構造変化を誘導補助し、複製開始機能をエンハンスする活性を持つことを示唆する。(3)ori構造のトポロジーとπ蛋白の機能特異性:oriγ及びoriαレプリコンの複製において、π蛋白の変異による複製開始とその頻度への効果にはそれぞれ特異性があり、しかも、Ori構造のトポロジーに関与するヒストン様蛋白、IHFやH-NS,の要求性が異なることが判明した。

Cell replication, chromosome replication, special replication start point, multiple replication start point, and multiple replication start pointsゲノムでのMolecular control mechanism for the start of replication, special に, interaction between starting points, and 殆ど见されていない. R6Kゲノムをモデルレプリコンとして选び、イニシエーターπ After the binding of protein イテロンに, it is clear how to activate the 2kb or more れたoriα, oriβを. This year's は, oriα, γレプリコン replication におけるπ protein divergence, DnaA protein のfunctional analysis より, DNA bending をcontaining むori structure divergence のreplication start とcontrol への labor cut を clarification した. (1) Functional analysis of π protein's terminal area: イニシエーターπ protein's legacy 伝子の无変different strainをconstructionし、ANALYSISすることにより, acidic アミノ acid にrich むπ protein C-terminal domain は replication start をネガティブに regulates する function をhold つことを clarified した. (2) The host's DnaA protein's R6K replication initiation reaction function-ori structure modification and induction of supplementary activity are shown: DnaA protein Isolation and analysis of DnaA protein, non-dependent replication of DnaA protein, isolation and analysis of DnaA protein, IS5R6K of existence on chromosomes oriγレプリコンDNA is transferred to the original DNA, and the replication ability independent of the DnaA protein is transferred to the original DNA.また、ベントDNAのfunctional analysisより、イニシオソームconstructionにおけるoriThe importance of DNA structureがshowsされた. The DnaA protein has a structural modification and induction support, and the replication start function is active and active. (3) Function specificity of ori structure and π protein: oriγ and びoriα レプリコンのreplication, π protein の変different によるreplication start and frequency へのEffect of the specificity of the があり、しかも、Ori structure of the のトポロジーに关与するヒストン様protein, IHFやH-NS, the requirements are different and the requirements are clear.

项目成果

犬塚 學: "薬剤耐性プラスミドR6Kのイニシエーター蛋白の構造と機能-カルボキシ端領域の機能分析." 生化学. 69(7). 577 (1997)

Manabu Inuzuka：“耐药质粒 R6K 起始蛋白的结构和功能 - 羧基末​​端区域的功能分析。” 69(7)。

Kiyono,M.: "Nucleotide Sequence and Expression of the Organomercurial-resistance Determinants from apseudomonas K-62 Plasmid pMR26." Gene. 189(2). 151-157 (1997)

Kiyono,M.：“假单胞菌 K-62 质粒 pMR26 的有机汞抗性决定因素的核苷酸序列和表达。”

犬塚 學: "インテロンをもつプラスミドの複製開始制御機構--特にイニシエータータンパク質を介してのDNAル-ピングの役割--" 生化学. 69(11). 1271-1277 (1997)

Manabu Inuzuka：“含内子质粒的复制起始控制机制——特别是通过起始蛋白的 DNA 环的作用——”生物化学 69(11) (1997)。