制御DNA領域の識別

DNA 调控区域的鉴定

• 批准号: 62106002
• 负责人: 犬塚 學
• 金额: $ 10.11万
• 依托单位: 福井医科大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Special Project Research
• 财政年份: 1985
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1985 至 1987
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-62106002/
• 关键词: 核酸コンフォーメーション; 制御DNA領域; DNA複製; 複製開始蛋白; プラスミド; 細菌染色体; 転写制御; 分子識別

DNA複製と転写は, 遺伝情報の維持と発現に係わる最も基本的な生命反応である. そこで, 本研究は厳密な特異性と正確な制御を必要とする複製開始を中心として, 機能分子による複製と転写の制御DNAの識別と調節の基本原理を解明すると共に, 制御DNA配列の検出システムを確立した.1.プラスミドの複製開始系:複製開始蛋白による複製開始点を含む制御領域の識別機構について, 犬塚はプラスミドR6Kのoriα領域の構造決定と機能分析を行ない, π蛋白の役割を解析した. 山口はpSC101のrep蛋白の反復配列, 逆反復配列への結合親和性を解析し, その遺伝子発現調節機構を示した. 伊藤はC_olE_2のrepキメラ蛋白を用いて, oriDNAの識別ドメインを決定した. 大坪はR100の細胞内安定保持に関与するpemK, pemI遺伝子を発見した.2.細菌染色体の複製開始系:吉川は枯草菌染色体の複製開始が特異的なDnaA-Box配列により負の制御を受けていることを発見すると共に, DnaA蛋白の特異的結合を実証した. 安田は大腸菌oriC複製の特異的制御因子を検索し, 複製開始に働く蛋白を見い出した. dnaK蛋白がこの複製に働くことを証明した.3.制御配列の識別法:中山は特異的制御配列を識別する微量蛋白の分離法を確立し, RSVによる細胞癌化に関与する細胞因子(38K蛋白)の精製, 同定に応用した. 深田は特異的DNA構造を識別するモノクローナル抗体を用いて, EGFレセプラー遺伝子発現へのDNA高次構造の関与を証明した. 宍戸はpNS1プラスミド中のプリンーピリミジン交互配列がZ構造をとること, および, rep遺伝子内に存在することを発見した. 以上のように, 予定した研究実績を協力により, ほぼ得ることができた.

DNA replication is the most fundamental aspect of life. In this study, we investigated the specificity and specificity of replication initiation protein, the identification mechanism of replication initiation protein, the structural determination and functional analysis of R6K and ori α domain, and the identification mechanism of pi protein. Analysis of binding affinity of pSC 101 rep protein by repeated alignment and reverse recombination, and demonstration of regulatory mechanisms for protein development. Ito: C_olE_2 and rep are used to determine the identity of oriDNA. 2. Bacterial chromosome replication initiation system: Bacillus yoshikawa chromosome replication initiation, DnaA-Box alignment, negative control, DnaA protein specific binding. Yasuda has identified a specific inhibitor of E. coli oriC replication, and the initiation of replication has been identified. 3. Identification method of regulatory sequence: identification of specific regulatory sequence in Zhongshan. Establishment of microprotein isolation method. Purification of cytokine (38K protein) related to RSV cell carcinogenesis. The identification of specific DNA structures by using anti-EGF antibodies and the identification of higher-order DNA structures related to EGF gene development. In the case of pNS 1, there is no such thing as an alternate arrangement of Z structures. The above mentioned research achievements are determined by the cooperation between the two sides.