プラスミドDNAの複製とその調節機構-特にイニシエーター蛋白の役割について

质粒DNA复制及其调控机制——尤其是起始蛋白的作用

• 批准号: 62615509
• 负责人: 犬塚 學
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: 福井医科大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1987
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1987 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-62615509/
• 关键词: DNA複製; プラスミド; イニシエーター蛋白; コピー調節; 転写制御; 細胞複製

細胞の複製は染色体の複製, 特にその開始反応が重要な調節過程である. そこで, 本研究はプラスミドR6Kをモデルレプリコンとして, イニシェーターπ蛋白が複製開始点を含む制御DNAをいかに厳密に識別し, 結合し, 複製の開始と調節にあずかるかを解明しようとするものである.1.イニシェーターπ蛋白の複製調節機能ドメインについて.プラスミドシステムでは, 細胞周期あたりの複製開始頻度をプラスミドのコピー数として容易に定量できる. そこでコピー数を変化させるπ蛋白変異の構造と機能分析を行い, 本蛋白の機能ドメインなどを解明した.(1)tsおよびcop変異π蛋白の構造と機能解析. コピー数を減増させるts22およびtrcop21変異はπ蛋白遺伝子上にマップされ, それぞれ305アミノ酸からなるπ蛋白の1アミノ酸の置換によることが判明した. また, cop21変異はコピー調節機能において, 野性株に対して劣性であった.(2)π蛋白の複製開始調節機能ドメイン領域は, コピー数を変化させる6種の変異の解析より, 305個のアミノ酸からなるπ蛋白の中央分の82個内に局在することが示された.(3)π蛋白のoriDNAへの結合ドメインは, 欠失変異株の解析より, 本蛋白のC末端側に存在することが明らかになった. このようなイニシエーター蛋白の機能ドメインの解明は, 宿主複製蛋白を含めての開始複合体の形成, その高次構造の解析を容易にする.2.π蛋白によるoriγ領域における転写活性の滅衰.π蛋白は複製開始に必須のori領域での転写を滅衰させることを, oriγ-1acZ融合プラスミドを用いて証明した. しかも, この活性がoriDNAへの結合能が増加したcop変異π蛋白により強く発現された実験結果は, ori領域での転写あるいは転写産物が複製開始と調節に, 直接関与することを明示した.

Cells の copying の は chromosome copy, に そ の start against 応 が important な adjustment process で あ る. そ こ で, this study は プ ラ ス ミ ド R6K を モ デ ル レ プ リ コ ン と し て, イ ニ シ ェ ー タ ー PI protein が copy starting point を む containing royal DNA を い か に 厳 に recognition し, combining し, Copy の began と adjust に あ ず か る か を interpret し よ う と す る も の で あ る. 1. イ ニ シ ェ ー タ ー protein の copy of PI regulating function ド メ イ ン に つ い て. プ ラ ス ミ ド シ ス テ ム で は, Cell cycle あ た り の duplicate frequency を プ ラ ス ミ ド の コ ピ ー number と し て easy に quantitative で き る. そ こ で コ ピ ー number を variations change さ せ る PI protein - line を い と の structure function analysis, Function of this protein の ド メ イ ン な ど を interpret し た. (1) ts お よ び の cop - different PI protein structure と function resolution. コ ピ ー number を reduction raised さ せ る ts22 お よ び trcop21 - traces of different は PI protein in に 伝 マ ッ プ さ れ, そ れ ぞ れ 305 ア ミ ノ acid か ら な る PI protein の 1 ア ミ ノ acid の replacement に よ る こ と が.at し た. ま た, cop21 - different は コ ピ ー adjust enginery に お い て, wild strains に し seaborne て recessive で あ っ た. (2) PI protein の duplicate adjust enginery ド メ イ は ン areas, コ ピ ー number を variations change さ せ る six の - different analytical よ の り, 305 の ア ミ ノ acid か ら な る PI protein の に within the central points の 82 innings in す る こ と が shown さ れ た. (3) PI protein の oriDNA へ の combining ド メ イ ン は, owe lost - different strains の parsing よ り, C at the end of this protein の side に exist す る こ と が Ming ら か に な っ た. こ の よ う な イ ニ シ エ ー タ の ー protein function ド メ イ ン の interpret は, host replication protein contains を め て の began to form complex の, そ の high times tectonic analytical を の easily に す る. 2. The PI protein に よ る ori gamma field に お け る planning write activity の out failure. PI protein は duplicate に must の ori field で の planning write を out failure さ せ る こ と を, ori gamma - 1 acz fusion プ ラ ス ミ ド を with い て prove し た. し か も, こ の active が oriDNA へ の binding energy が raised plus し た cop - different PI protein に よ り strong く 発 now さ れ た be は 験 results, ori field で の planning write あ る い は product planning write が duplicate と adjust に, direct masato and す る こ と を express し た.

项目成果

Manabu Inuzuka: Ann.Rep.Inst.Virus Res.,Kyoto Univ.29. 35-36 (1987)

Manabu Inuzuka：Ann.Rep.Inst.Virus Res.，京都大学 29。