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プロリン特異性ペプチダーゼの構造とプロリン特異性発現機構の解明

阐明脯氨酸特异性肽酶的结构和脯氨酸特异性表达机制

基本信息

批准号：
09267228
负责人：
芳本忠
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09267228/
关键词：
触媒酵素反応プロリン結晶プロテアーゼペプチダーゼ

项目摘要

本研究の目的は、プロリン特異性酵素のプロリンへの選択的基質特異性発現とオリゴペプチダーゼの機構を、合成基質を使った解析および結晶解析の両面から解明することにある。合成基質による研究は、プロリンの5員環に相当する構造を持つ合成基質や阻害剤を作り酵素化学的に研究する。一方、酵素のX線結晶解析を行いプロリン特異性酵素の立体構造を初めて明らかにすることにある。このことにより、変性タンパク質には作用できず、低分子のオリゴペプチドにのみ作用するオリゴペプチダーゼの機構や、このユニークなプロリンへの特異性の機構が明らかになり、細胞内でのペプチドやタンパク質の代謝の生理学的研究や酵素の応用に大きく貢献できると思われる。1)プロリンイミノペプチダーゼのX線結晶解析を行い、結晶構造はP4_12_12スペースグループはa=b=165.6,c=169.8の正方晶系であるこを明らかにした。同じ5員環構造に特異性をも持つピログルタミルペプチダーゼの結晶解析を行い、基質特異性発現の機構を立体構造から推定した。2)プロリン特異性酵素のプロリンへの基質特異性発現機構を明らかにするため、プロリンをサルコシンや類似の化合物に置き換えた基質を合成して調べた。プロリン特異性酵素は5員環のアルファ炭素側より窒素側の方がより強く認識されることを明らかにした。3)ヒト脳由来のプロリルエンドペプチダーゼ遺伝子のクローニングを行い、発現ベクターを用いて酵素の生産をおこなった。

The purpose of this study is to investigate the substrate-specific development, molecular mechanism, and crystallization of selected enzymes. Study of synthetic substrates, their 5-membered ring equivalents, and their structural and enzyme chemical properties X-ray crystallographic analysis of a single enzyme The mechanism of the mechanism of the 1) X-ray crystal analysis of P4_12_12 crystal structure: a=b= 165.6, c =169.8 tetragonal crystal system. The crystal analysis of the same 5-membered ring structure is carried out, and the mechanism of matrix specific development is estimated. 2) Substrate-specific mechanisms for the production of prime-specific enzymes and for the synthesis of similar compounds. The 5-member loop of the enzyme was identified by the enzyme. 3) The origin of the enzyme is the development of enzyme production.