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アセチルコリンエステラーゼが持つペプチダーゼ作用に着目した新規阻害剤の開発

开发专注于乙酰胆碱酯酶肽酶作用的新型抑制剂

基本信息

批准号：
10877369
负责人：
芳本忠
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

项目摘要

最近我々は、種々のプロリン特異性ペプチダーゼの遺伝子のクローニングを行い、アセチルコリンエステラーゼと同じ、新ファミリーであることを明らかにした。アセチルコリンエステラーゼはPro-Xペプチダーゼ作用を持つことが報告されており、新しい観点からアセチルコリンエステラーゼへの阻害害剤の開発を計画した。まず、プロリン特異性ペプチダーゼの構造を調べるため、ヒト脳プロリルエンドペプチダーゼ遺伝子をクローニングしその塩基配列から酵素のアミノ酸配列を明らかにした。次いで、大腸菌で発現させ酵素を精製し、ハンギングドロップ法で初めてヒト脳酵素を結晶化することに成功した。現在、X線結晶構造解析中である。また、ヒト染色体上の酵素遺伝子の場所をFISH法で調べたところ第6染色体6q13.6-q21に位置することが明らかになった。一方、同じファミリーに属するプロリルアミノペプチダーゼを結晶化し、X線結晶解析法により立体構造を明らかにした。その構造からプロリンへの選択的基質特異性の発現機構を部位特異的変異法を用いて研究した。酵素の活性部位は活性ドメインとヘリックスドメインの触媒残基(Ser,His,Asp)が存在し、その近くに疎水ポケットが存在しPhe139がプロリンとスタックすることで5員環を認識し、Glu204がピロリジンのアミノ基の認識に関与することが明らかになった。更にArg136が基質のP1'カルボニル酸素と結合して、ペプチドのP1'の認識に関与することを明らかにした。まずは、このプロリルアミノペプチダーゼの構造とアセチルコリンエステラーゼの活性部位の構造の比較検討から、新規インヒビターの開発を進めていく。

Recently, I have been working on a new project to improve the quality of the products. The development plan of the protection agent of the Pro-X selection agent is reported. The structure of the enzyme is regulated by the enzyme specificity. The enzyme specificity is regulated by the enzyme specificity. In the second place, E. coli was successfully purified and crystallized. Now, X-ray crystal structure analysis is in progress. The position of enzyme gene on chromosome 6q13.6-q21 was determined by FISH. The crystal structure of the crystal structure The matrix specificity and discovery mechanism of the structure and the selection of the protein are studied by site-specific differential methods. The catalytic residue (Ser,His,Asp) of the enzyme active site is present in the active site, and the catalytic residue (Ser, His, Asp) of the enzyme active site is present in the active site. In addition, Arg136 can be used as a substrate for P1'protein binding. A comparative study of the structure of the active site of the new type of protein and its development.