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プロリルエンドペプチダーゼ・インヒビターが示す抗健忘作用の機構解明

脯氨酰内肽酶抑制剂抗遗忘作用机制的阐明

基本信息

批准号：
08877330
负责人：
芳本忠
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至 1997
项目状态：
已结题

项目摘要

プロリルエンドペプチダーゼは脳に活性が高く、バソプレシンやブラジキニンなどの低分子生理活性ペプチドに作用するプロリン特異性ペプチダーゼである。この酵素に特異的なインヒビターが実験動物に起こした健忘症を防止することを見い出してきた。プロリルエンドペプチダーゼ遺伝子の研究から、アセチルコリンエステラーゼはプロリルエンドペプチダーゼ・スーパーファミリーに含まれることが推定された。これまで、脳から酵素が精製されているが、脳酵素遺伝子のクローニングは報告されていない。そのため牛およびヒト脳プロリルエンドペプチダーゼ遺伝子のクローニングを行った。牛脳プロリルエンドペプチダーゼcDNAは2130bpで710個のアミノ酸をコードしていた(分子量80640)。このcDNAを発現ベクターに挿入し大腸菌で発現させ、Toyopear1HW-65CとDEAE-Toyopear1のカラムクロマトグラフィーにより単一に精製した。酵素はpH8.0で最大活性を示し、等電点は5.5であった。また、酵素はこれまで報告されている真核生物由来の酵素と同様DFPとPCMBで阻害された。更に、ヒト脳プロリルエンドペプチダーゼ遺伝子cDNAは牛脳由来のそれと同様2130bpで710個のアミノ酸をコードしていた(分子量80732)。同様にcDNAを発現ベクターに挿入し大腸菌で発現させることに成功した。現在、脳内各部位でのmRNAの量を測定し、アセチルコリンエステラーゼの分布との関係を調べている。

プロリルエンドペプチダーゼは脳にACTIVE HIGHく、バソプレシンやブラジキニンThe low-molecular-weight physiologically active などのペプチドに action するプロリン specificity ペプチダーゼである.このzyme is a specific enzyme that prevents amnesia from occurring in animals.プロリルエンドペプチダーゼ弝子の研究から、アセチルコリンエステラーゼはプロリルエンドペプチダーゼ・スーパーファミリーに contain まれることが presumed された.これまで, 脳からzyme がRefined されているが, 脳zyme legacy 伝子のクローニングは report されていない.そのため牛およびヒト脳プロリルエンドペプチダーゼ伝子のクローニングを行った. Beef breast milk cDNA 2130bpで710 のアミノ acid をコードしていた (molecular weight 80640).このcDNAを発appears ベクターにinserts coliform で発appears させ、Toyopear1HW-65 CとDEAE-Toyopear1のカラムクロマトグラフィーにより単一に精品した. The enzyme has a maximum activity of pH 8.0 and an isoelectric point of 5.5.また、Enzyme はこれまでreport されているEukaryote origin のzyme と同様DFP とPCMB でblock された.に、ヒト脳プロリルエンドペプチダーゼ弝子cDNAは牛荳originのそれと同様2130bpで710 のアミノ acid をコードしていた (molecular weight 80732). The insertion of cDNA into coliform bacteria was successful. Now, the amount of mRNA in each part of the body is measured, and the distribution and relationship between them are adjusted.