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プロリン特異性ペプチダーゼの構造とプロリン特異性機構解明

脯氨酸特异性肽酶的结构及脯氨酸特异性机制的阐明

基本信息

批准号：
11144231
负责人：
芳本忠
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至 1999
项目状态：
已结题

项目摘要

プロリンは他のアミノ酸と異なり、イミノ酸として特殊な構造をとることから多くのプロテアーゼやペプチダーゼはプロリン周辺に作用できないことが知られている。そのため、種々のプロリン特異性ペプチダーゼが存在し、多くのプロリンを持つ生理活性ペプチドやプロテオリシスに関係し代謝調節に重要な働きをしていると考えられている。本研究ではプロリン特異性酵素の中、プロリルアミノペプチダーゼの立体構造を明らかにし、更にその構造からプロリンへの選択的基質特異性の発現機構を部位特異的変異法を用いて明らかにした。酵素の活性部位は活性ドメインとヘリックスドメインの間に触媒残基(Ser,His,Asp)が存在し、その近くに疎水ポケットが存在する。この疎水ポケットの中央付近にPhe139とTyr149があることから、これらのアミノ酸をアラニンに部位特異的変異法で変えた。Phe139Alaのみ活性が低下したことからPhe139がプロリンとスタックすることで5員環を認識していることが分かった。次いで、Glu204をGlnに変えた結果、活性に大きく影響したピロリジンのアミノ基の認識に関与することが明らかになった。最後に、Arg136が基質のP1'カルボニル酸素と近い位置にあることから、このArg136をAlaに変えると、ペプチダーゼ作用はほぼ完全に消失した。しかし、アミダーゼ作用がほぼ天然の酵素と同程度残っており、ペプチドのP1'の認識に関与することを明らかにした。以上の結果から、プロリンの認識機構を初めて明らかにすることができた。

I don't know how to do it. I don't know how to do it. I don't know what to do. There are many kinds of diseases, such as the existence of special drugs, the existence of physiological activities and the maintenance of physiological activities. do not change their physiological activity. The purpose of this study is to use the method to detect the location of the specific enzyme in the system. In this study, the special enzyme is used to create a three-dimensional system, and to improve the performance of the system. The active part of the enzyme, the active part, the active part, the Please tell me that the center is close to the Phe139, Tyr149, sour, sour, sour, The Phe139Ala activity is low. The Phe139 activity is low. The results of the secondary, Glu204 and Gln experiments, the results of the active information, the knowledge of the basic information and the information of the students in the system. In the end, the Arg136 gene, P1', acid, acid, Ala, acid, acid, The effect of natural enzymes is similar to that of natural enzymes in the same degree. As a result of the above results, information and information institutions have begun to understand that they are in the process of receiving information.